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培养农杆菌的利福平怎么配?

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有网友碰到这样的问题“培养农杆菌的利福平怎么配?”。小编为您整理了以下解决方案,希望对您有帮助:

解决方案1:

一般都用甲醇或DMSO配制,溶解度还是可以的,一般为20-50mg/ml稀释一千倍用;在配制后会有一些沉淀,在使用的时候混匀后用就可以了。甲醇和DMSO不会对农杆菌有影响。

解决方案2:

利福平的配制步骤如下:
1. 从LB固体平板上,挑取含有目的基因的单菌落。
2. 接种到3 ml LB液体培养基中,于恒温揭床上,27C,以180 r/min 的转速振荡培养过夜,至AOC为0.6~0.8。
3. 摇培过夜的菌液按1%~2%的比例,转入新配置的无抗生素的LB培养基中,在与上述相同的条件下培养6 h左右AO0=0.2~0.5时即可用于转化。
4. 将按上述方法培养的A00=0.6~0.8 的菌液,转入无菌离心管中,于室温条件下,以5000 I/ min 的转速,离心10 min,弃去上清液,菌体用1/2 MS 液体培养基重悬,稀释至A300=0.2 左右,用于转化。
5. 将菌液倒入无菌的小培养皿中,取不具Kan抗性的烟草无菌苗的幼嫩、健壮叶片,去主脉,将叶片剪成0.5 cm2的小块,放入菌液中,浸泡5~10min。
6. 取出叶片置于无菌滤纸上吸去附着的菌液,同时设未经农杆菌侵染的叶盘作为阴性对照。
7. 将侵染后的烟草叶片接种在不含任何激素和抗生素的MS基本培养基上,用封口膜封好培养皿,28C黑暗中培养2~~4 d。
8. 将黑暗培养2~4 d的烟草叶片转移到筛选培养基中,用封口膜封好培养皿,在光照为2 000~10 000 lx,温度控制在25~~28℃,16/8 h(白天/夜晚)光暗条件下选择培养。
9. 约2~3周后,待不定芽长到1cm左右时,切下不定芽并转移到生根培养基上进行生根培养,5~10 d后长出不定根后即可转移到土中培养。
以上步骤完成后,就可以进行农杆菌的培养了。

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