仪器分析实验 课程教案
实验名称：高效液相色谱混合物的定量和定性测定 实验类型 验证性 教学时数 7 每组人数 8 一、实验目的及要求： 1．掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法； 2．了解高效液相色谱的构造、原理； 3．学习高效液相色谱仪的操作。 教学重点： 1、溶液配制的条件 2、色谱工作站参数的设定。 3、定量定性分析方法 教学难点： (1)、学习高效液相色谱的使用方法、了解该仪器的结构； (2)、定量定性分析方法 二、实验原理 高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。 三、主要仪器和试剂 主要仪器：安捷伦1260液相色谱仪，配有紫外检测器，Phenomenex ODS 柱]； 1自动进样器。 试剂：色谱纯甲苯、苯、丙酮、甲醇、超纯水； 未知样品1、2、3、4。 教学内容及过程 （一）检查实验预习报告 （二）上次实验存在的问题 （三）高效液相色谱操作 （四）实验内容及步骤 A、溶液配制 1 配制标准系列溶液 三组分混标液：每mL溶液分别含5 uL苯、甲苯和丙酮。 分别准确移取0、2.50、5.00、10.00和20.00 uL甲苯容易溶于1.00mL甲醇中。 2 流动相的配制、过滤和除气。 标准苯测试液。 未知样品1号、2号、3号和4号。 B、上机测定 1 更换流动相。 2 按操作规定开动仪器，排气后让色谱柱平衡（流动性为80%甲醇，速度1.0 mL/min）。 3 设置色谱工作站参数。 Agilent HPLC仪 色谱柱： 流动相：甲醇：水=8：2 流速：1.0 mL/min 检测波长：254nm 进样体积：10μL 4 进样、采集色谱图。 1）三组分混标液 2）标准溶液系列 3）未知样品 5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。 6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。 7 关闭仪器。 （五）提问 1、高效液相色谱溶液配制需要注意哪些操作？ 答：药品需要色谱纯的；配制好的溶液需要抽气处理——这步操作有些高效液相色谱能自动完成。 2、利用高效液相色谱进行定量和定性分析的依据有哪些？ 答：定性分析根据相同色谱系统下同一物质的保留时间相同；定量分析的依据是在一定浓度范围内，浓度与峰面积(或峰高)成正比。 （六）数据记录与结果处理 确定样品内的物质，确定样品中甲苯的浓度。 1）定性分析实验记录 2）定量分析实验记录 丙酮浓度（ul/mL） 峰面积（uV*s） 标样1 标样2 标样3 标样4 50 75 100 125 1875145 2876718 3750275 4607851 丙酮标样标准曲线 课后小结： 本次仪器分析实验高效液相色谱混合物的定量和定性测定，学生通过仪器分析实验，基本了解高效液相色谱的性能及操作，掌握高效液相色谱分析的基本原理，学习高效液相色谱混合物的定量和定性分析，为以后从事仪器设备开发和设计工作，打下良好的基础。
