北方药学２０１６年第１３卷第１１期 ５ 不同炮制方法对中药延胡索中有效成分含量的影响 江国荣 榻雪梅 潘雪莲 刘少文 何玲玲 （１＿佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）药剂科佛 山 ５２８０００；２．佛山市中医院药剂科佛山５２８０００） 摘要：目的：比较醋炙、醋煮、酒炙、醋烘等炮制方法对延胡索中有效成分含量的影响。方法：将延胡索生品分别经醋炙、醋煮、醋烘、 酒炙后，以水超声法对不同炮制品提取，高效液相色谱法测定去氢紫堇碱、延胡索乙素成分的含量，乙腈：Ｏ．１％磷酸溶液＝７２：２８作 为试验的流动相，色谱柱ＡｇｉｌｅｎｔＣ 色谱柱，柱温为室温，检测波长为２８２ｎｍ。结果：延胡索经不同炮制后生物碱去氢紫堇碱含量均 有所升高，醋烘、醋炙、酒炙延胡索中延胡索乙素的含量有所上升，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５ ｏ结论：高效液相色谱法测定中药延 胡索不同炮制品中的２种有效成分，操作步骤简单、重复性好，根据药材的治疗需要，采用醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法可以增加延 胡索有效成分的含量。 关键词：延胡索去氢紫堇碱延胡索乙素不同炮制高效液相色谱法 中图分类号：Ｒ２８４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２－８３５１（２０１６）１１－０００５一Ｏ２ 瓶∞０ ｎ 延胡索（ｃｏｒｙｄａｌｉｓ Ｒｈｉｚｏｍａ）为多年生罂粟科草本植物延胡 索（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｖａｎｈｕｓｕｏ Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ）的干燥块茎Ⅲ，因有活血、止 痛、利气的功效，临床上多用于治疗脘腹疼痛、经闭痛经、产后瘀 阻日。生物碱是中药延胡索中的主要有效成分，其中药材中含有 的大部分为结合态的生物碱，只有碱性较弱的成分以游离态的 形式存在Ｅ］５。延胡索多以炮制后入药治疗疾病，醋煮、醋烘、醋炙、 酒炙均为２０１５年版《中国药典（一部）》收载的炮制延胡索饮片 ０ＪＤ０ ＯＪ）Ｉ３ ０￣０１０ ｌ 耵 经典方法嗍，但是国内文献中对于不同炮制方法对延胡索的有效 成分研究报道较少目，因此，本文采用了高效液相色谱法 （ＨＰＬＣ），以延胡索主要的有效成分去氢紫堇碱、延胡索乙素为 参考指标，探讨上述四种炮制方法对延胡索有效成分含量的影 响，以期为优化延胡索炮制工艺提供参考，实验研究步骤如下。 １实验材料 ｎ渤 ｎ ｎ ｎ抛时 彻ｌ０ Ｏ，ｆｆ￣ Ｌ 一 三 ：４ ８ １０，２ ｌ４糯ｌＲ ２０嚣２４ ２６ ｒａｉｎ １．１实验仪器：日本岛津ｌ １００高效液相色谱仪（主要包括紫外 图２延胡索样品色谱图 １：延胡索乙素；２：去氢紫堇碱 检测系统、色谱工作站），电子分析天平（美国梅特勒天平公司， ３供试品溶液的配制：取中药延胡索生品及不同炮制品，精密 精密度０．０００１ｇ），ＣＯ：真空干燥箱（北京实验仪器公司），超声提 ２．称定后粉碎机打成细粉，分别过４Ｏ目筛后置于带瓶塞的三角锥 取仪器（上海生物科技有限公司）。 超声３０ｍｉｎ，后静置到室温后将上 １－２实验药材与实验试剂：延胡索生品药材购于本市中药材公 形瓶中，１５０ｍＬ水溶液定量，按照上述步骤重复操作２次，合并３次超声滤液后 司（批号为１２０８２５）；延胡索乙素对照品（批号：２０１２０３２３）、去氢 层溶液滤过，紫堇碱对照品（批号：２０１２０６２０）均购于中国食品药品生物制品 蒸干，残渣加入５０ｍＬ水溶解后加入浓氨水１０ｍＬ，乙醚溶液作 每次３０ｍＬ，合并３次萃取液后置于烧 检定所；陈醋选择山西老陈醋，黄酒为即墨市生产，乙腈、甲醇溶 为萃取剂连续萃取３次，杯中，水浴锅上蒸干，蒸干后的浓缩品适量，精密称定，置于５ｍＬ 液均为色谱纯，水为三蒸水。 容量瓶中，甲醇溶液溶解后定溶至刻度，得供试品溶液。 ２．４对照品溶液的制备：称取延胡索乙素、去氢紫堇碱对照品适 ２．１延胡索不同炮制品炮制方法 精密称定，置于ｌＯｍＬ容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度，即得 ２．１．１醋炙延胡索：将从中药材公司购买的同一批号的延胡索生 量，品洗净，晾干，２０％的陈醋作为浸泡剂将生品浸泡，醋液被药材 对照品溶液。 ２．５线性关系考察：精密吸取延胡索乙素、去氢紫堇碱对照品 完全吸尽后，生品文火上炒干。 １０、０．２０、０．４０、０．６０、０．８０、１．０ｍＬ置于２ｍＬ容量瓶中，甲醇溶液定 ２．１．２醋煮延胡索：２０％陈醋将延胡索生品浸润，浸润时间以醋 ０．按照“２．２”项下的色谱条件进样，以色谱峰面积作为 液被生品完全吸尽为准，后武火将浸润完成后的药材药液煮沸 溶至刻度，对照品的含量作为横坐标，进行回归处理，得到线性回 后，文火将溶液蒸煮，醋液吸收完全后置于ＣＯ 烘箱中进行干 纵坐标，２方法与结果 归方程分别为：Ｙ＝４．１２ｘ１０￣－２．５２￣１０ （ｒ＝０．９９９８）（去氢紫堇碱在 ３４５～３．３１５￣ｇ范围内线性关系良好）；Ｙ＝２．４３ｘ１０￣－３．１２ｘ１０ （ｒ＝ ２．１．３醋烘延胡索：延胡索生品适量，称重后２０％的陈醋进行浸 ０．９９９７）（延胡索乙素在０．１９０～１．３５９￣ｇ范围内线性关系良好）。 润，待药材中的醋液被药材吸尽后，置设定温度为１２０￣Ｃ的ＣＯ ０．２．６精密度考察：吸取延胡索乙素对照品溶液，按照“２．２”项下的 烘箱中，烘烤４０ｍｉｎ，取出后在室温下晾干。 峰面积的ＲＳＤ值为０．２１％，表明高效 ２．１．４酒炙延胡索：中药延胡索生品适量，２０％的黄酒浸润待浸 色谱条件重复进样５次，燥。 泡溶剂吸收完全后，文火将浸润生品炒干。 ２．２色谱条件的选择：ＡｇｉｌｅｎｔＣ （２５０ｍｍ￣４．６ｍｍ，２．５ ｍ）为实验 过程中的色谱柱，乙腈：０．１％磷酸溶液（三乙胺调节ｐＨ为５．２— ５．４）＝７２：２８为流动相，柱温为室温，检测波长为２８２ｎｍ，进样量 为ＩＯＩ￣Ｌ，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ。延胡索乙素、去氢紫堇碱有较好的 液相色谱仪的精密度好。 ２．７稳定性考察：取“２．３”项下的供试品溶液，分别在０、２、４、８、 １２、２４ｈ按照色谱条件进样ｌＯＩｘＬ，测定峰面积值，其ＲＳＤ值为 １．９５％，表明供试品溶液在２４ｈ内有较好的稳定性。 ２．８重复性考察：取同一批延胡索样品分别重复进样５次，测定 其ＲＳＤ值为１．７５％，表明该方法的重复性 分离，按照延胡索乙素色谱峰进行计算理论塔板数＞３０００。见图 延胡索乙素的含量，较好。 １、图２。 （下转１２１页） 北方药学２０１６年第１３卷第１１期 １２１ 表２因素水平表 表５方差分析表 ２．２．５结果：根据正交试验所得的数据可知，最佳提取条件为：乙 ２．２．４．２正交试验供试品的制备与测定：分别取荜拨粉末约１ｇ置 醇浓度８０％、提取次数为２次、提取时间为４０ｍｉｎ。 于九个烧杯中，按表２设计的实验条件分别测定胡椒碱含量，结 ２．３讨论 果见表３。 ２．３．１最大波长：经紫外分光光度法确认可知，胡椒碱最大吸收 表３实验设计表 波长为３４３ｎｍ。 ２．３．２影响因素：在正交试验过程中，通过表４中的主效应方差 分析，按表４的数据可见因素主次顺序为Ｂ＞Ａ＞Ｃ，因此对荜拨 中胡椒碱提取影响因素最大的是提取次数。 ２．３．３溶剂选择：在实验过程中对三种提取溶液的优缺点进行了 分析，甲醇虽然价格相对较低，但提取的效果不理想；乙酸乙酯价 格较高、提取效果不理想、挥发ｆ生较强，而且长期吸人会对人的身 体健康造成很大危害；乙醇的提取率很高，而且安全，但相对甲醇 成本较高。通过权衡利弊，本实验采用乙醇作为溶剂对胡椒碱进 行提取，结果显示的最佳提取工艺对小规模生产有借鉴意义。 参考文献 ［１】侯文洁，张卫刚，薛文娇瑚椒中胡椒碱的提取工艺研究 中 国调味品，２００８（５）：５６—５８． 平均值 Ａ Ｂ Ｃ 【２】国家药典委员会．中华人民共和国药典【Ｓ１．第一部，中国医药 科技出版社，２０１０：２１９． 【３】刘笑，侯顺超，顾林．胡椒碱不同提取方法的比较研究［Ｊ］．中国 酿造，２０１５，３４（２）：４７—５０． △基金项目：内蒙古自治区教育厅课题。编号：ＮＪＺＹ１４２６３ （上接５页） ２．９加样回收率试验：取５份已知含量的样品，延胡索乙素含量 碱会生成易溶性的醋酸盐，提高了溶出率 。从上述表格中的数 为测定参照，将适量的延胡索乙素对照品溶液加入５份样品，按 据可见，延胡索生品与延胡索炮制后的水煎液含有的成分性质 照色谱条件进样，以回归方程进行样品含量的测定，计算加样回 完全一致，生物碱的含量经醋炙后的延胡索水煎液中含量最高， 收率，见表１。 表１延胡索乙素加样回收率 而不经过任何炮制的延胡索生物碱的含量最低，酒炙品的含量 居中。治疗疾病的有效成分的增加可以增强药材在临床上的疗 效，进而证实延胡索经醋炙后治疗效果的有效性。 由上述可知，几种延胡索炮制品经比较，延胡索的醋炙品以 及酒炙品是临床上最为常用的药材炮制品种，本次实验中采用 的超声提取方法对延胡索各种炮制品，提取方式简单，容易操 作，另ＨＰＬＣ法在检测延胡索乙素、去氢紫堇碱时精密度高、重 复性好，醋炙、酒炙、醋烘等炮制方法均可以增加延胡索有效成 分的含量。 ２．１Ｏ样品含量测定：各炮制品供试品溶液，按照“２．２”项下的色 参考文献 １１徐捷．不同炮制方法对延胡索有效成分影响研究『ＪＪ．河北医药， 谱条件进样测定峰面积，按照线性回归方程对含量进行计算，见 ｆ衣厶 表 样品中延胡索乙素、去氢紫堇碱的含量 表２样品中延胡索乙素、去氢紫堇碱的含量 ２０１３，３５（３）：４５４—４５６． 『２１沈志冲．元胡不同炮制方法对延胡索乙素含量的影响［Ｊ］．现代 预防医学，２０１１，３８（２１）：４４５４—４４５７． 『３］郑弘，许红玮．延胡索不同炮制方法的薄层色谱鉴别对比研究 ｌＪ１．中医学报，２０１３，２８（５）：６９５—６９６． 『４１国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［ｓ］．北京：中国 医药科技出版社，２０１５：１２１—１２５． ３小结 『５１刘传统，祁红．ＨＰＬＣ法测定益气养阴合剂中厚朴酚和延胡索 乙素的含量［Ｊ】．云南中医中药杂志，２０１５，３６（１）：５９—６１． 中药延胡索作为临床上经常用于治疗疾病的药物，多数均 【６降荣，蔡青青，牛彦兵，等．熟延胡索饮片药理作用的对比研究 以炮制品的形式应用于临床，经酒炙后的延胡索有效成分生物 Ⅲ．中国实验方剂学杂志，２０１４，２０（１９）：１３３—１３７．
