东南大学学ＪＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖ Ｍ嚣Ｍ ｅｄ医Ｓｃ学 ｉＥ版ｄｉ；２、一 ，。ｌ６， 。ｃｔ；＇ ３５（＼ ５），：’ ６７… ３。６７７ ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖ・６７３・ 重组人５型腺病毒ＨＩＯ１联合索拉非尼对 肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的体外抑制作用 李璐璐 ，张秀 ，金萧萧 ，王彩莲 ，陈蓉 （１．东南大学医学院，江苏南京２１０００９；２．东南大学附属中大医院肿瘤科，江苏南京２１０００９） ［摘要］目的：探讨重组人５型腺病毒ＨＩＯ１联合索拉非尼（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）体外对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２增殖及凋 亡的影响。方法：将重组人５型腺病毒Ｈ１０１和索拉非尼分成单用组及联合用药组，作用于ＨｅｐＧ２细胞，另 设不加药对照组。ＣＣＫ－８法检测ＨｅｐＧ２细胞存活率，流式细胞术及ＤＡＰＩ染色检测ＨｅｐＧ２细胞凋亡。结 果：重组人５型腺病毒ＨＩＯ１及索拉非尼均可显著抑制ＨｅｐＧ２细胞增殖并诱导其凋亡；与重组人５型腺病毒 Ｈ１０１或紊拉非尼单用相比，两药联合对ＨｅｐＧ２细胞增殖抑制及诱导凋亡作用更为显著（均Ｐ＜０．０５）。结 论：重组人５型腺病毒Ｈ１０１、索拉非尼单用及联用均能体外抑制ＨｅｐＧ２细胞增殖并诱导其凋亡，且在特定 索拉非尼浓度范围内两药联合存在协同作用。 ［关键词］肝细胞癌；重组人５型腺病毒ＨＩＯ１；索拉非尼；协同作用 ［中图分类号］Ｒ７３５．７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１６７１—６２６４（２０１６）０５－０６７３—０５ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１—６２６４．２０１６．０５．００６ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ Ｈ１０１ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ａｇａｉｎｓｔ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｕ Ｌｕ。ｌｕ ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉｕ ，ＪＩＮ Ｘｉａｏ。ｘｉａｏ ，ＷＡＮＧ Ｃａｉ‘ｌｉａｎ ，ＣＨＥＮ Ｒｏｎｇ （１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＭｅｄｗｉｎｅ，Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｆｏＯｎｅｏｌｏｇｙ， Ｚｈｏｎｇｄａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ Ｈ１０１ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＨｅｐＧ２ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈ１０１，ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ａｌｏｎｅ ａｎｄ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｕｎｔｒｅａｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ Ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｕｓｉｎｇ ＣＣＫ一８ ａｓｓａｙ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ ４，６一Ｄｉａｍｉｄｉｎｏ一２一 ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ（ＤＡＰＩ）ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ＨＩＯ１ ａｎｄ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ｕｓｅｄ ａｌｏｎｅ ｏｒ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｂｏｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｈ１０１ ｏｒ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ａｌｏｎｅ．ＣＯ— ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｌｅｄ ｔｏ ａ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ Ｈ１０１ ａｎｄ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ｓｈｏｗ ａ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ Ｈ１０１；ｓｏｒａｆｅｎｉｂ；ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ［收稿日期］２０１６。０２—２３ ［修回日期］２０１６・０４—２５ ［基金项目］国家自然科学青年基金资助项目（８１２１１３１） ［作者简介］李璐璐（１９９０一），女，安徽淮北人，在读硕士研究生。Ｅ—ｍａｉｌ：８３６８７４７３６＠ｑｑ．ｃｏｍ ［通信作者］王彩莲Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｃａｉｌｉａｎ６５＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｔｏｍ；陈蓉Ｅ－ｍａｉｌ：ｒｒ１９７７＠１６３．ｃｏｒｎ ［引文格式］李璐璐，张秀，金萧萧，等．重组人５型腺病毒Ｈ１０１联合索拉非尼对肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的体外抑制作用［Ｊ］．东南大学学报：医学 版，２０ｌ６，３５（５）：６７３・６７７． ・６７４・ 原发性肝癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）是消 东南大学学报（医学版） ２０１６年１０月，３５（５） 药组（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ组）及重组人５型腺病毒Ｈ１０１联合索 化系统常见恶性肿瘤之一，居全球常见恶性肿瘤第５ 拉非尼组（Ｈ＋Ｓ组）。索拉非尼组各复孔加入含不同 １．８５、３．７、７．４、１４．８、２９．６ ｐ．ｍｏｌ・Ｌ～；Ｈ＋Ｓ组各复孔 位，是恶性肿瘤相关性死亡的第３位危险因素 Ｊ。索 拉非尼是第一个能使晚期肝癌患者生存获益的靶向治 疗药物，可用于治疗不能手术切除或远处转移的原发 性肝细胞癌 ｑｊ，但其治疗晚期肝癌疗效有限且不良 反应发生率高，仍迫切需要新的治疗手段提高肝癌的 浓度索拉非尼的培养基使其终浓度分别为０、０．９２５、 加入含重组人５型腺病毒Ｈ１０１的培养基使其ＭＯＩ均 为２００，并加入索拉非尼使其终浓度分别为０、０．９２５、 １．８５、３．７、７．４、１４．８、２９．６ ｐ￣ｍｏｌ・Ｌ～，继续培养４８ ｈ。 总体疗效。目前，溶瘤病毒抗肿瘤正在受到广泛关注。 重组腺病毒Ｈ１０１是利用基因工程技术敲除了人５型腺 各复孔加入ＣＣＫ－８试剂１０ ｌ，培养箱内孵育２ ｈ，酶 标仪上测定４５０ ｎｍ波长的ＯＤ值，计算细胞存活率 病毒的Ｅ１Ｂ一５５ＫＤ基因和Ｅ３区部分基因片段（７８．３— ８５．８ ｍ）而获得的一种溶瘤腺病毒，其可选择性地在 抑癌基因ｐ５３功能缺陷的肿瘤细胞中复制 』。而 ＥｌＢ－５５ＫＤ缺失的腺病毒在选择性地杀伤ｐ５３基因缺 失型肝癌细胞的同时对ｐ５３基因野生型肝癌细胞杀伤 效果较差 Ｊ。本研究将重组人５型腺病毒Ｈ１０１与索 拉非尼相联合，探讨两者对ｐ５３基因野生型肝癌细胞 株ＨｅｐＧ２的杀伤作用。 ｌ材料与方法 １．１ 材料 １．１．１细胞系人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２，购自中国科学 院上海生命科学研究院。 １．１．２ 主要试剂与仪器 重组人５型腺病毒Ｈ１０１ （上海三维生物技术有限公司），索拉非尼（Ａｐｅｘｂｉｏ公 司，美国）以ＤＭＳＯ溶解，均一２０℃保存；ＤＭＥＭ培养 基、胎牛血清、０．２５％胰蛋白酶溶液（Ｇｉｂｃｏ公司，美 国）；ＣＣＫ一８细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ细胞凋亡检测试剂盒、ＤＡＰＩ试剂盒（上海碧云 天生物技术有限公司）；酶标仪（Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ ＦＳ０，瑞 士）；流式细胞仪（ＢＤ公司，美国）。 １．２实验方法 １．２．１ 细胞培养使用含１０％胎牛血清、ｌ％青霉素一 链霉素的ＤＭＥＭ培养基，置于３７℃、体积分数５％ ＣＯ：培养箱内培养肝癌细胞株ＨｅｐＧ２，每周传代２— ３次。 １．２．２ ＣＣＫ。８法检测细胞增殖情况将对数生长期 ＨｅｐＧ２细胞以５ Ｘ １０。孔 的密度接种于９６孑Ｌ板，各组 设５个复孔，于３７℃、体积分数５％ＣＯ：培养箱内培养 １２ ｈ后进行药物干预。（１）单药干预：重组人５型腺 病毒ＨＩＯ１以不同感染复数（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ＭＯＩ 为０、１０、１００、２００、５００、１ ０００）处理ＨｅｐＧ２细胞，分别 继续培养２４、４８、７２、９６ ｈ；索拉非尼以不同浓度（０、２、 ４、６、８、１０ Ｉｘｍｏｌ・Ｌ ）处理ＨｅｐＧ２细胞，分别继续培 养２４、４８、７２ ｈ。（２）两药联合干预：分设索拉非尼单 （ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ），并根据金氏公式计算ｑ值，评价两药 间相互作用。细胞存活率＝（实验组ＯＤ值一空白组 ＯＤ值）／（对照组ＯＤ值一空白组ＯＤ值）×１００％ １．２．３ 流式细胞术检测细胞凋亡 分设对照组 （ｃｏｎｔｒｏｌ组）、单药重组人５型腺病毒ＨＩＯ１组（ＨＩＯ１ 组）、单药索拉非尼组索拉非尼组、Ｈ＋ｓ组。将对数 生长期ＨｅｐＧ２细胞以２ Ｘ １０ 孔 的密度接种于６孑Ｌ 板：１２ ｈ后进行药物干预：Ｈ１０１组加入含重组人５型 腺病毒ＨＩＯ１的培养基使其ＭＯＩ为２００，索拉非尼组 加入含索拉非尼的培养基使其终浓度为７．４ Ｉｘｍｏｌ・ Ｌ～，Ｈ＋Ｓ组加入相应感染复数的重组人５型腺病毒 ＨＩＯ１和相应浓度的索拉非尼，对照组加入相应体积含 ０．１％ＤＭＳＯ培养基。培养４８ ｈ后，以不含ＥＤＴＡ的 ０．２５％胰蛋白酶消化后离心收集细胞，并以结合液重 悬，依次加入５ １ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ—ＦＩＴＣ及１０ ｌ碘化丙啶 染色液，混匀，室温避光孵育２０ ｍｉｎ，随即流式细胞术 检测细胞凋亡情况。 １．２．４ ＤＡＰＩ染色观测细胞凋亡状态实验分组及药 物干预同上。分组处理的ＨｅｐＧ２细胞培养４８ ｈ后，去 除旧培养基，ＰＢＳ冲洗１次，固定３０ ｍｉｎ，ＰＢＳ 冲洗３次，室温下ＤＡＰＩ染色１０ ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗净残余 染液，以荧光显微镜紫外光激发下观测并拍照。 １．３统计学处理 每组实验均重复３次，采用ＳＰＳＳ １７．０统计软件 进行数据分析，数据以 ±ｓ表示，行ｔ检验，Ｐ＜０．０５ 为差异有统计学意义。 ２ 结 果 ２．１ 重组人５型腺病毒ＨＩＯ１及索拉非尼单药对 ＨｅｐＧ２细胞的增殖抑制作用 重组人５型腺病毒ＨＩＯ１对ＨｅｐＧ２细胞存在显著 增殖抑制作用，且当ＭＯＩ为２００或更高时，细胞存活 率无显著差异，ＭＯＩ等于２００为Ｈ１０１对ＨｅｐＧ２细胞 的最适感染复数（图１Ａ）。索拉非尼亦可显著抑制 ＨｅｐＧ２细胞增殖，并呈剂量一时间依赖性（图１Ｂ），经 计算得其４８ ｈ ＩＣ铀为７．４ ｐ，ｍｏｌ・Ｌ一。 李璐璐，等．重组人５型腺病毒Ｈ１０１联合索拉非尼对肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的体外抑制作用 ・６７５・ ｏ／ｏ／醉加 ∞ 舳 ∞Ａ １２０ ｌ００ ８ｏ ＭｏＩ １Ｏ ｈ ｈ ｈ ｌ００ ２００ ５００ ｌ ０００ 褥 程６０ 罴４ｏ ２０ Ｏ ２４ ９６ ０ ２ ４ ６ ８ １０ １２ ｃ（索拉非尼）／（￣ｍｏｌ・Ｌ ） 图１ ＣＣＫ－８法检测重组人５型腺病毒Ｈ１０１及索拉非尼单药对ＨｅｐＧ２细胞存活率影响 Ｆｉｇ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｈ１０１ ｏｒ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ｏｎ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ＣＣＫ‘８ ａｓｓａｙ ２．２重组人５型腺病毒Ｈ１０１联合索拉非尼对ＨｅｐＧ２ Ｂ 逞斟蜒忙霉再 联合均能显著诱导ＨｅｐＧ２细胞的凋亡，且两药联合较 单药作用更显著（Ｐ＜Ｏ．０５，图３）。ＤＡＰＩ染色显示，荧 光显微镜下，各给药组均出现细胞密度减低，细胞核浓 集、边聚现象，且联合给药组的细胞凋亡现象更显著 （图４）。 细胞的增殖抑制作用 固定重组人５型腺病毒Ｈ１０１感染复数为２００、索 拉非尼浓度为０～０．９２５ ｐ．ｍｏｌ・Ｌ 时对ＨｅｐＧ２细胞 的毒性作用小，随浓度增加索拉非尼对ＨｅｐＧ２细胞产 加 ∞ 舳 ∞ ∞ 加 ０ 生显著增殖抑制作用（Ｐ＜０．０５）。索拉非尼浓度为 ０—３．７ ｐ￣ｍｏｌ・Ｌ 时，单药索拉非尼组与联合组对 ＨｅｐＧ２细胞的增殖抑制作用存在显著差异（Ｐ＜ ０．０５），且在此浓度范围内两药联合表现为协同作用。 索拉非尼浓度达７．４ ｐ￣ｍｏｌ・Ｌ 时，两组细胞存活率 无显著差异（图２）。 ３讨 论 目前肝癌仍无特效的治疗手段，外科手术及肝移 植是肝癌的主要治疗方法，但仅１５％肝癌患者可接受 此治疗，且预后仍较差，中位生存期小于１年；其他传 统治疗方式如射频消融、经动脉化学栓塞（ＴＡＣＥ）、放 射治疗、全身化疗等使肝癌患者生存获益均不显著，索 拉非尼分子靶向治疗虽可一定程度提高肝癌患者总生 存期，但疗效有限 Ｊ。 溶瘤病毒疗法是指利用肿瘤细胞自身功能性基因 的失活或缺失，使用可自主复制病毒靶向性感染并杀 伤肿瘤细胞，而正常组织细胞免受破坏的抗肿瘤方 式ｌ 。溶瘤病毒主要通过以下几方面发挥抗肿瘤作 用：（１）选择性感染并杀伤肿瘤细胞；（２）破坏肿瘤血 ０ ０．９２５ １．８５ ３．７ ７．４ １４．８ ２９．６ ｃ（索拉非尼）／（ｔｔｍｏｌ・Ｌ ） 供；（３）促进肿瘤相关抗原释放，激发机体的抗肿瘤免 疫＿７ Ｊ。腺病毒具有能够感染像和非像细胞、 对外源基因插入容量调节性强、不与宿主染色体整合 及无内在致癌性的优点，使其成为溶瘤病毒抗肿瘤治 疗中研究最多的病毒载体 Ｊ。然而溶瘤病毒抗肿瘤 亦有其因素，如血清细胞因子的中和、机体单核吞 与阴性对照比较，ａ Ｐ＜０．０５；与索拉非尼组比较，ｂ Ｐ＜０．０５ 图２ ＣＣＫ－８法检测重组人５型腺病毒Ｈ１０１与索拉非尼联合 对ＨｅｐＧ２细胞存活率影响 Ｆｉｇ ２ Ｅ仃ｅｃｔｓ ｏｆ ＣＯ＂ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈ１０１ ａｎｄ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ｏｎ ｃｅｌｌ ｉａｂｉｌｖｉｔｙ ｏｆＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ＣＣＫ－８ ａｓｓａｙ 噬系统的清除隔离、由肿瘤供血血管外溢受限以及瘤 内扩散效果差等 。另外，恶性肿瘤常伴柯萨奇一腺 病毒受体表达的下降，使肿瘤细胞对腺病毒易感性降 低，也是影响溶瘤腺病毒抗肿瘤的重要因素¨ 。 重组人５型腺病毒Ｈ１０１是利用基因工程技术获 ２．３重组人５型腺病毒Ｈ１０１联合索拉非尼对ＨｅｐＧ２ 细胞凋亡情况影响 重组人５型腺病毒Ｈ１０１及索拉非尼单药或两药 ・６７６・ 东南大学学报（医学版） ２０１６年ｌ０月，３５（５） ） 一０一 ｒ０一 Ｅ０一 一 一０一 ｌｌＯ一 ＣＯＩｌｔｒｔ ｌ ９３。。 ７ ６２￣ｏ 、 １ 一 §墨 ：’ ． －，ｊ０． 。。 ■■■躲ｔ ： ２ ８ ７２％ ｌ３ ４２ ｆ１ 瞥 Ｕ 要 ． 艺 釜 ｌ ｂ ； ・ ；’ 掣 器１ ， ｊ ０ ＿＿＿＿— ｉ ■■■ ． ｌＯ” ｌ０。 ｌ０： ｌ（） 。 … １０” ｌ０。 ｌ０ ｌ０ ｌ０ ＡｎｎｃｘｉｎＶ—ＦＩ Ｉ＇Ｃ ‘ｊ埘Ｅｆ｛组¨：较．ａ Ｐ＜０．０５ 图３流式细胞术检测ＨｅｐＧ２细胞凋亡 Ｆｉｇ ３ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ （） 图４ ＤＡＰＩ染色检测ＨｅｐＧ２细胞凋亡（×４００） Ｆｉｇ ４ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ＤＡＰＩ ｓｔａｉｎｉｎｇ 得的溶瘤病毒野 人５型腺病毒的Ｅｌ Ｂ５５一ＫＤ旗 『大ｌ产物通过抑制ｐ５３基冈功能使其能在正常组织细胞 巾进行复制，敲除该Ｉ 域后使重组人５型腺病毒…０ｌ 选择性在ｐ５３基 功能缺陷的肿瘤细胞ｆｆ１复制；Ｅ３ Ｉ 的基 片段可以编码病毒死亡赁白，去除后保证重 人５划腺病毒Ｈｌ０ｌｌｌ 床应刚的安全性。 既 研究 表明，重组人５型腺病毒Ｈ１０１对肝癌、黑色素瘤、 网膜坶细胞瘤、鼻Ⅱ【ｑ癌等 性肿瘤均有显著 ＇Ｊ ］ Ｌ／Ｊ ＇Ｖ“ Ｉ￣ ｔ 作川 。 重组人５ 腺病毒Ｈｌ０ｌ 被巾同食品药 晶监督管理局批准川于临床头颈部恶性肿瘤的治疗 ， 靶向治疗相结合治疗恶性肿瘤的体内外研究取得较好 的抗肿瘤效果” ．ｌ木研究结果显爪，重组人５型腺病毒Ｈｌ０】、索托 非 或两者联合均可显著抑制ＨｅｐＧ２细胞增殖 在重组人５型腺病毒川０ｌ感染复数 片诱导其凋 为２００时，其细胞增殖抑制作川与更高感染复数时无 著差异，Ｉ天１此ＭＯＩ等于２００为其埘Ｈｅｐ（；２细胞的最 适感染复数 索拉非尼浓度为０～３．７ ｏＩ・Ｌ 时，重组人５型腺病毒…０ｌ与索托｛Ｅ 联合可协同 抑制ＨｅｐＧ２细胞增殖（Ｐ＜０．０５），其巾浓度为０．９２５ ｍｔ １．Ｌ 时，其单Ｊ｛拦田胞毒性作用较小（Ｐ＞０．０５）， 但与匝组人５型腺病毒Ｈ１０１联合对ＨｅｐＧ２增殖可产 索托非尼是一种口服多激酶抑制剂，县有蚁重抗肿瘤 作『｝］：一方 通过抑制ＲａＩＶＭＥＫ／ＥＲＫ信 通路Ａ接 抑制肿瘤细胞生长，另一方面通过抑制 管内皮生Ｋ 生协同抑制作，Ｈ，说明索托非 对重组人５型腺病毒 Ｈ１０ｌ细胞杀伤作Ｈ＿Ｊ存在促进效应 在索拉非Ｊ已浓度 达７．４ Ｉ￣ｍｏｌ・ 。时，重组人５ 腺病毒Ｈ１０１作刚逐 渐不明显，索拉非 成为抑制细胞增殖主要因素。 子受体、ｍｌ小板源生长 子受体、纤维坶细胞生Ｋ 于受体阻断肿瘤新生ｌ『ｎ＿管的形成，间接抑制肿瘤细胞 增殖和转移 。。已有多项将溶瘤病毒与化疗、分子 李璐璐，等．重组人５型腺病毒Ｈ１０１联合索拉非尼对肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的体外抑制作用 此，重组人５型腺病毒Ｈ１０１仅与特定浓度范围内索 拉非尼联合对ＨｅｐＧ２细胞增殖起协同抑制作用。 综上所述，重组人５型腺病毒Ｈ１０１联合索拉非 尼治疗肝癌是一种有效的抗肿瘤方式，但索拉非尼浓 度应控制在合适范围内，否则联合治疗意义降低。本 实验结果可为溶瘤腺病毒联合分子靶向药物治疗肝癌 提供相关依据，并为临床上肝癌的治疗提供新的治疗 思路，但重组人５型腺病毒Ｈ１０１联合索拉非尼联合 对不同细胞株的杀伤效果及相关机制仍须进一步 ・６７７・ ［１Ｏ］ＬＯＵＳＴＡＬＯＴ Ｆ，ＫＲＥＭＥＲ Ｅ Ｊ，ＳＡＬＩＮＡＳ Ｓ．Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｙ— ｎａｍｉｃｓ ａｎｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ ａｎｄ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｒｅ－ ｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１６，３２２：３３１—３６２． ［１１］ＬＩＮ Ｘ Ｊ，ＬＩ Ｑ Ｊ，ＬＡＯ Ｘ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｒ￣ｓａｒｔｅｉｒｌａ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅ— ｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ。５ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ＨＩＯ１ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ（ＴＡＣＥ）ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｏｖｅｒ－ ａｌｌ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ。ｆｒｅｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｕｎｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕ— ｌｒ ａｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）［Ｊ］．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ，２０１５，１５：７０７． ［１２］ＣＵＮ Ｂ，ＳＯＮＧ Ｘ，ＪＩＡ Ｒ，ｅｔ １．Ｃｏｍｂｉａｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ａｄｅ— ｎｏｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ ｅｎｈａｎｃｅｓ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｂｉｌｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ 研究。 ［参考文献］ ［１］ＤＩＮＧ Ｊ，ＷＡＮＧ Ｈ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉ— ｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１４，３４６（１）：１７—２３． ［２］ＣＨＥＮＧ Ａ Ｌ，ＫＡＮＧ Ｙ Ｋ，ＣＨＥＮ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｉｆｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｓｏｒａｆｅｎｉｂ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｓｉａ。Ｐａｃｉｉｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｄ－ ｖａｎｃｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ａ ｐｈａｓｅ ＩＵ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ， ｄｏｕｂｌｅ。ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ。ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｉｒｌａ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ， ２００９，１０（１）：２５－３４． ［３］ＬＬＯＶＥ Ｊ Ｍ，ＲＩＣＣＩ Ｓ，ＭＡＺＺＡＦＥＲＲＯ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｓｏｒｆａｅｎｉｂ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２００８， ３５９（４）：３７８。３９０． ［４］ＹＵ Ｗ，ＦＡＮＧ Ｈ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｉｒｌａｓ ｗｉｔｈ ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ，２００７，７（２）：１４１—１４８． ［５］赵健，吕岩，郭亚军．Ｅ１Ｂ５５ｋＤａ缺陷型腺病毒对人肝癌细 胞的杀伤研究［Ｊ］．中华肿瘤杂志，２００１，２３（５）：３６６－３６８． ［６］ＣＲＩＳＳＩＥＮ Ａ Ｍ，ＦＲＥＮＥＴＹＥ Ｃ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｐａ－ ｔｏｃｅｌｌｕｌｒａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｇａｓｔｏｒｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ（Ｎ Ｙ），２０１４， １０（３）：１５３—１６１． ［７］ＲＵＳＳＥＬＬ Ｓ Ｊ，ＰＥＮＧ Ｋ Ｗ，ＢＥＬＬ Ｊ Ｃ．Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ｖｉｒｏｔｈｅｒａｐｙ ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１２，３０（７）：６５８—６７０． ［８］ＲＵＳＳＥＬＬ Ｓ Ｊ，ＰＥＮＧ Ｋ Ｗ．Ｖｉｕｒｓｅｓ ａｓ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ［Ｊ］． Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ，２００７，２８（７）：３２６。３３３． ［９］ＵＵＳＩ・ＫＥＲＴＦＵＬＡ Ｈ，ＨＵＬＩＮ－ＣＵＲ￣Ｓ Ｓ，ＤＡＶＩＥＳ Ｊ，ｅｔ ａ１． Ｏｎｃｏｌｙｔｉｅ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ：ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｆｏｒ ｖｅｃｔｏｒ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏ‘ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｖｉｕｒｓｅｓ，２０１５，７（１１）： ６Ｉ）（）９—６Ｏ４２． ｕｖｅａｌ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｂｌｏｃｋ『Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ Ｔ． ｈｅｒ，２０１２，１３（２）：７７。８４． ［１３］ＳＯＮＧ Ｘ，ＺＨＯＵ Ｙ，ＪＩＡ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｗｉｔｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇ ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ａｄ— ｅｎｏｖｉｕｒｓ ＨＩＯ１［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，２０１０，５１（５）： ２６２６－２６３５． ［１４］ＬＩＵ Ｒ Ｙ，ＺＨＯＵ Ｌ，ＺＨＡＮＧ Ｙ Ｌ，ｅｔ １ａ．Ａｎ ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ａｄｅｎｏｖｉ・ ｒｕｓ ｅｎｈａｎｃｅｓ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｒｅｐ— ｌｉｃａｔｉｏｎ。ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ ｂｙ ｒｅｓｃｕｉｎｇ ｉｔｓ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１３，４４２（３—４）： １７１－１７６． ［１５］ ＬＵ Ｗ，ＺＨＥＮＧ Ｓ，ＬＩ Ｘ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｒａ。ｔｕｍｏｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈ１０１，ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ，ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｈｅｍｏ— ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｃａｎｃｅｒｓ：ａ ｐｉｌｏｔ ｐｈａｓｅ ＩＩ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｉｒａｌ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００４，１０（２４）：３６３４－ ３６３８． ［１６］ ＨＥＯ Ｊ，ＢＲＥ￣ＢＡＣＨ Ｃ Ｊ，ＭＯＯＮ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ＪＸ。５９４，ａ ｔｒａｇｅｔｅｄ ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ｐｏｘｖｉｒｕｓ，ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｓｏｒ— ｆａｅｎｉｂ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｅｆｉｆｃａｃｙ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ，２０１ １， １９（６）：１１７０—１１７９． ［１７］ ＫＨＵＲＩ Ｆ Ｒ，ＮＥＭＵＮＡＩＴＩＳ Ｊ，ＧＡＮＬＹ Ｉ，ｅｔ ａ１．Ａ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｉｒａｌ ｏｆ ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ＯＮＹＸ ０１５，ａ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ—ｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇ ａｄｅ－ ｎｏｖｉｒｕｓ，ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ａｎｄ ５。ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｗｔｈ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ， ２０００，６（８）：８７９—８８５．
