第２９卷第２期 ２０１０年４月 电 子显微学报 Ｖｏｌ一２９．Ｎｏ．２ ２Ｏ１Ｏ ４ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｏｃｉｅｔｙ 文章编号：１０００—６２８１（２０１０）０２—０１８２．０３ 大肠杆菌噬菌体Ｂｐ７溶菌周期的电镜观察 刘霄飞，任慧英 ，刘文华，温建新，邹 玲，刘长浩 （青岛农业大学动物科技学院，山东青岛２６６１０９） 摘 要：应用透射电镜观察分析噬茵体Ｂｐ７侵染并裂解大肠杆菌的过程。结果显示，噬菌体Ｂｐ７头部外廓呈六边 形，平均直径约９３ ｌｌｍ，尾长约１０６ ｌｌｍ，有尾鞘；噬茵体Ｂｐ７通过尾丝吸附于杆状的大肠杆菌上。噬茵体Ｂｐ７侵染 大肠杆菌后３０ ｍｉｎ时处于隐蔽期，４５ ｍｉｎ时处于成熟阶段，６０ ｍｉｎ时已经进入释放期，一个溶茵周期大约为６Ｏ ａｒｉｎ。本研究为噬茵体作为抗生素替代品治疗细茵性感染的研究提供了形态学依据。 关键词：大肠杆菌；噬茵体；侵染过程；替代品；形态观察 中图分类号：Ｒ３７８．２ １；Ｑ３３６ 文献标识码：Ａ 大肠杆菌对药物极易产生抗药性，近几年８０％ 菌营养肉汤中，置空气浴振荡器中，３７℃，１７０ ｒ／ｒａｉｎ 振荡培养１２ ｈ，４ ｏＣ保存备用。噬菌体Ｂｐ７的宿主 大肠杆菌已对常用的抗菌药物产生严重的耐药性， 且多重耐药菌株普遍，占所有耐药菌株的５０％以 上，并呈上升趋势…。研究发现能够感染多株同种 细菌的多价烈性噬菌体在细菌病的治疗方面有着广 阔的应用前景 ，而且用噬菌体治疗细菌感染的实 例也屡见不鲜。烈性噬菌体在敏感菌内以复制方式 进行增殖，包括吸附、穿人、生物合成、成熟和释放几 个阶段。从噬菌体吸附至细菌溶解释放出子代噬菌 体，称为噬菌体的复制周期或溶菌周期 。本文报 道应用透射电镜观察并验证噬菌体Ｂｐ７的溶菌周 期的。 菌增殖液为１００ ｌ大肠杆菌（０７８）保存液于５ ｍｌ 营养肉汤中，３７ ｏＣ，１７０ ｒ／ｍｉｎ振荡培养至对数期所 得。 将噬菌体Ｂｐ７母液和宿主菌增殖液按最佳 ＭＯＩ（感染复数）混匀作用５ ｒａｉｎ，加入５ ｍｌ灭菌营 养肉汤，混匀，３７ ｏＣ，１７０ ｒ／ｒａｉｎ振荡培养至澄清。 １．３负染法透射电镜观察 取噬菌体Ｂｐ７母液和宿主菌增殖液各５Ｏ ｌ，混 匀，３７℃互作。互作１０ ｍｉｎ、１５ ｍｉｎ时分别取出样 品加入２倍体积２．５％的戊二醛终止感染。取样品 悬液２０ １滴于铜网上，待其自然沉淀１５ ｒａｉｎ，用滤 大肠杆菌病是鸡的常发病，其治疗面临严重的 细菌耐药性问题。课题组从养鸡场分离纯化了一株 可裂解鸡致病性大肠杆菌的噬菌体Ｂｐ７，本研究应 用透射电镜观察分析其对大肠杆菌的溶菌周期，为 噬菌体作为抗生素替代品治疗细菌性感染的研究提 供理论依据。 纸从侧面吸收多余液体，加１滴２％磷钨酸（ＰＴＡ） 于铜网上，染色１０ ｍｉｎ，用滤纸从侧面吸去染液，干 燥后在ＪＥＭ．１２００ＥＸ透射电镜下观察、拍照。 １．４超薄切片法透射电镜观察 将噬菌体Ｂｐ７增殖液与宿主菌增殖液按体积 比１：１混匀，３７ ｏＣ，１７０ ｒ／ｒａｉｎ振荡培养，并计时。 １５、３０、４５、６０、７５ ｒａｉｎ时依次取出相应样品，加入２ １材料与方法 １．１ 材料 倍体积的２．５％的戊二醛终止反应。４ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离 心１０ ｍｉｎ，弃上清，沿管壁缓慢加入２０倍体积的 ２．５％的戊二醛，４℃静置固定４ ｈ以上。将样品送 噬菌体：青岛农业大学兽医微生物学实验室分 离保存的一株宽裂解谱的大肠杆菌噬菌体，命名为 Ｂｐ７，它能裂解０２３、０７３、０７８、０８８等血清型的大肠 至青岛大学医学院电镜室按常规制备超薄切片， ＪＥＭ．１２００ＥＸ型透射电镜下观察、拍照。 杆菌，宽噬率达３５％，其中０７８为该噬菌体能裂解 优势血清型大肠杆菌 。 １．２噬菌体的增殖 ２结果与讨论 透射电镜图片显示，噬菌体Ｂｐ７有一个多面体 取生长良好的大肠杆菌单菌落接种到５ ｍｌ无 收稿日期：２００１．１１—１１；修订日期￣２００９－１２－３１ 作者简介：刘霄飞（１９８５一），女（汉族），山东招远人，硕士，Ｅ－ｍａｉｌ：ｉｂｅｌｉｅｖｅ—ｉｆ＠１６３．ｃｏｒｎ． 通讯作者：任慧英（１９６８一），女（汉族），山东莱阳人，教授，硕士研究生导师，Ｅ—ｍａｉｌ：ｒｅｎｒｅｎ０２２８＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ
