DPPH法测定自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜清除DPPH自由基的能力

除DPPH自由基的能力

谭曜，陈平，许赛慧，朱杰

(宁波海关技术中心，浙江宁波315012)[摘要]通过比较VC对照品与自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜对DPPH自由基的清除能力，来了解自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜抗衰老、防氧化功效。结果表明自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜中加入的VC与面霜里面的其他成分具有协同作用，具有更好的清除DPPH自由基的能力。[关键词]自制；蜂王幼虫；面霜；协同作用；DPPH自由基[中图分类号]O65[文献标识码]A[文章编号]1007-1865(2019)18-0143-02DeterminationofDPPHFreeRadicalScavengingAbilityofHomemadeQueenBeeLarvaCreamwithWhitening,Anti-agingandAntiWrinkleFunctionsbythe

DPPH·Assay

TanYao,ChenPing,XuSaihui,ZhuJie(TechnologyCenterofNingboCustoms,Ningbo315012,China)Abstract:Bycomparingtheeffectsofthehomemadequeenbeelarvacreamwithwhitening,anti-agingandantiwrinklefunctionsandVCReferencesubstanceontheDPPHfreeradicalscavengingability,itsanti-agingandanti-oxidativeeffectswereunderstood.TheresultsshowedthattheVCaddedtothehomemadequeenbeelarvacreamwithwhitening,anti-agingandantiwrinklefunctionshadsynergisticeffectwithotheringredientsinit,andhadabetterabilitytoscavengeDPPHfreeradicals.Keywords:homemade；queenbeelarva；cream；synergisticeffect；DPPHfreeradical蜂王幼虫是蜜蜂受精卵消化吸收工蜂分泌的新鲜蜂王浆生长发育的幼虫[1]。我国是养蜂大国，蜂王幼虫是生产蜂王浆时产生的副产品，长期以来大部分蜂王幼虫未被充分利用。随着科研工作者对蜂王幼虫化学成分的研究，发现蜂王幼虫含有丰富的蛋白质，可达干重的50%左右[2]，同时其含有丰富的维生素、矿物质、生物活性酶等成分，具有极高的营养价值。大量研究证实，蜂王幼虫同时具有抗衰老[3-4]、抗氧化[5]、提高免疫力[6]、抗疲劳[7]等保健功效。蜂王幼虫因其含水量高(75%左右)，营养丰富，常规加工方法由于受热时间长，产品品质较差，而低温冻干技术，可充分保存其营养成分与生物活性成分活性[8]，所以常常将蜂王幼虫制成蜂王幼虫冻干粉加以保存和利用。因此开发蜂王幼虫新用途具有重要地现实意义。本文针对现状利用蜂王幼虫冻干粉开发了一款自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜。体外评价和筛选物质抗氧化活性的方法有很多，如1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazylradical2,2-diphenyl-l-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl，DPPH)法、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)ammoniumsalt，ABTS)法、氧化自由基吸收能力(oxygenradicalabsorbancecapacity，ORAC)法、铁离子还原法(ferricreducingantioxidantpower，FRAP)、法[9]等。与其他相比，DPPH法有稳定性好、灵敏度高、操作简单等优点[10-11]

。DPPH法已在全世界范围内被广泛用于抗氧化剂自由基清除能力的定量分析[9]。为了了解本款面霜抗衰老、防氧化功效，本文使用DPPH法测定自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜清除DPPH自由基的能力。剩余量为去离子水。在室温、紫外照射(消毒灭菌)下搅拌均匀，得到一款乳液状制剂。)；1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)(分析纯，阿拉丁试剂有限公司)；维生素C、无水乙醇等均为分析纯；试验用水为去离子水。2实验方法

1仪器与试药

1.1仪器UV752型紫外-可见分光光度计(上海蒨华科技仪器有限公司)；BP11D型电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)。1.2试药自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜(含有蜂王幼虫冻干粉1%~10%、活性剂0.1%~10%，乳化剂1%~10%、保湿剂1%~10%、润肤剂1%~20%、稠剂调节剂0.1%~5%、2%维生素C、防腐剂0.1%~1%、香精0.2%~2%、色素0.1%~0.5%等，[收稿日期][基金项目][作者简介]2019-07-09宁波市科技富民项目(2017C10067)2.1DPPH法测定供试品抗氧化、清除自由基的原理[1]

内二苯基苦肼基自由基[DPPH·]是一种稳定的以氮为中心的自由基，在517nm波长处有最大吸收。[DPPH·]乙醇溶液呈紫色，其浓度与吸光度呈线性关系。在[DPPH·]乙醇溶液中加入供试品后，供试品可以与[DPPH·]结合或发生替代，使[DPPH·]数量减少，溶液颜色变浅，表现为：其在517nm波长处的吸光度不断减小，直至达到稳定。因此，可以通过在517nm波长处检测供试品对[DPPH·]自由基的清除效果，计算其抗氧化能力。2.2供试品溶液的制备称取自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜供试品0.5g，溶解于乙醇溶液中定容于100mL，得到质量浓度为5mg/mL。然后依次取10mL、5mL、2mL、1mL、0.5mL、0.1mL，用乙醇定容于100mL，稀释配成0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.025mg/mL、0.005mg/mL，不同质量浓度的供试品溶液。2.3DPPH溶液的制备取DPPH2mg，置于50mL棕色容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，得到质量浓度为0.04mg/mL的DPPH溶液。置于4℃冰箱中冷藏、备用。2.4维生素C阳性对照品溶液的制备精密称取维生素C0.5g，用无水乙醇溶解并定容于100mL的棕色容量瓶中，得到质量浓度为5mg/mL的阳性对照品溶液，置于4℃冰箱中，避光冷藏。然后依次取10mL、5mL、1mL、0.5mL、0.1mL，用乙醇定容于100mL，稀释配成0.5mg/mL，0.25mg/mL，0.05mg/mL，0.025mg/mL，0.005mg/mL，不同质量浓度的对照品溶液。2.5DPPH自由基清除能力的测定[2]

依次精密移取乙醇、DPPH溶液各2mL，置于10mL具塞试管中，混合后充分振摇，30min后．于517nm处测定吸光度(Ac)；谭曜(1972-)，男，湖南人，硕士研究生，高级工程师，主要研究方向为化学分析。·144·广东化工www.gdchem.com2019年第18期第46卷总第404期依次精密移取供试品溶液、乙醇各2mL，置于10mL具塞试管巾，混合后充分振摇，30min后，于517nm处测定吸光度(Aj)；依次精密移取供试品、DPPH溶液各2mL．置于10mL具塞试管中，混合后充分振摇，室温下静置30min，于517nm处测定吸光度(Ai)。平行测定2次。按公式K=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%计算各自由基清除剂对DPPH自由基的清除率。33.1结果

VC对照品溶液清除率曲线表1不同质量浓度Vc对DPPH自由基的清除率Tab.lDPPHradicalscavengingeffectofvitamineCρ/(mg/mL)AiAjAc清除率/%0.50.0140.000.39796.470.250.0150.000.39796.220.10.0470.000.39788.160.050.0760.000.39780.860.0250.1370.000.39765.490.0050.2460.000.39738.04根据表1测得的VC对照品溶液清除率数据，绘制清除率曲线，具体见图1。图1不同浓度Vc对照品的清除率曲线Fig.1ClearancerateconcentrationscurveofvitamineCwithdifferent由图1可知，不同浓度的VC对照品溶液在较低浓度下线性关系较好；当V0.25C96.22mg/mL%、96.47、0.5对照品溶液浓度分别为%mg/mL，表明对时，其清除率分别为0.05mg/mLDPPH自由基有较高的清除率，可用80.86、%0.1、88.16mg/mL%、、于与样品溶液的对照当中。3.2样品溶液清除率曲线表2样品对DPPH自由基的清除率Tab.2DPPHradicalscavengingeffectofthesampleρ/(mg/mL)AiAjAc清除率/%2.50.0460.010.39788.661.250.0820.000.39779.350.50.2540.000.39736.020.250.3250.000.39718.140.050.3790.000.3974.530.0250.3820.000.3973.780.0050.3900.000.3971.76根据表2测得的样品溶液清除率数据，绘制清除率曲线，具体见图2。图2不同浓度样品对照品的清除率曲线Fig.2Clearanceratecurveofsampleswithdifferentconcentrations由图2可知，样品溶液浓度分别在1.25mg/mL、2.5mg/mL时，其清除率分别为79.35%、88.66%，表现出对DPPH自由基有较高的清除率。另外，从表2与表1中可知，2.5mg/mL自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜与0.1mg/mL维生素C的清除DPPH自由基能力相当。而自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜中还原剂只含有2%维生素C，则表明2.5mg/mL自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜中只含有0.05mg/mL维生素C，说明自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜中的维生素C与面霜中蜂王幼虫冻干粉等其他成分起到协同作用，使自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜中维生素C清除DPPH自由基能力提高了一倍。4结论

(1)自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜表现出对DPPH自由基有较高的清除率。说明自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜具有较好地抗氧化、防衰老功效。(2)自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜中的维生素C与面霜中蜂王幼虫冻干粉等其他成分混合在一起起到协同作用，使自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜中的维生素C清除DPPH自由基能力提高了一倍，使得自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜的抗氧化、防衰老功效进一步得到提高，说明配方组合比较合理。参考文献

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