抗癫痫药物皮肤不良反应与HLA-B^1502基因的相关性研究

2019年1月第9卷第1期

抗癫痫药物皮肤不良反应

*

与HLA-B1502基因的相关性研究

孔韦东1  黄振勇2  成丽英1  潘秀静1  罗永钊2  唐亚吊1  刘 倩2  刘艳枚2  陈梅芳1  钟文君1

1.广东省连南瑶族自治县人民医院，广东连南 513300；2.广东省清远市人民医院分子诊断中心，广东清远 511518

[摘要] 目的 通过临床研究分析探讨芳香族抗癫痫药物所诱发的皮肤不良反应与患者HLA-B*1502基因之间的相关性。 方法 选取从2015年4月～2017年10月于我院就诊治疗的发生癫痫的患者581例为研究

对象，使用了AEDs类抗癫痫药物进行了治疗，发生皮肤不良反应的有95例，未发生皮肤不良反应的患者有486例，在发生皮肤不良反应的患者中MPE有49例，SJS有27例，TEN有19例，对以上患者进行基本资料及HLA-B*1502基因的分析，采用统计软件进行统计分析，确定皮肤不良发应与HLA-B*1502基因之间的相关性。 结果 研究结果表明，SJS以及TEN皮肤不良反应的发生与HLA-B*1502之间具有明显的相关性，而MPE不良反应的发生与该基因无明确的相关性。 结论 在临床上使用AEDs类抗癫痫药进行抗癫痫治疗时，可以提前检测患者HLA-B*1502基因，从而达到预测其皮肤不良反应的作用，根据利弊平衡使用该类药物进行抗癫痫治疗。

[关键词] AEDs；皮肤不良反应；HLA-B*1502；抗癫痫

[中图分类号] R742.1   [文献标识码] A   [文章编号] 2095-0616（2019）01-26-04

Study on the correlation between skin adverse reactions and

*

HLA-B1502 gene of antiepileptic drugs

KONG Weidong  HUANG Zhenyong  CHENG Liying  PAN Xiujing  LUO Yongzhao    12211TANG Yadiao  LIU Qian  LIU Yanmei  CHEN Meifang  ZHONG Wenjun1.People's Hospital of Liannan Yao Autonomous County,Guangdong Province,Liannan 513300,China;2.Molecular Diagnostic Center of Qingyuan People's Hospital,Guangdong Province,Qingyuan 511518,China

[Abstract] Objective To discuss the correlation between skin adverse reactions and HLA-B*1502 gene of antiepileptic drugs by clinical research. Methods 581 patients with epilepsy admitted for treatment from April 2015 to October 2017 were selected as subjects.After being treated with AEDs antiepileptic drugs,there were 95 cases of skin adverse reactions while 486 cases were free from the reaction.Among the 95 cases of skin adverse reactions,there were 49 cases of MPE,27 cases of SJS and 19 cases of TEN.The basic data and HLA-B*1502 gene of the above patients were analyzed by statistical software,and the correlation between the skin adverse reactions and HLA-B*1502 gene was determined. Results The results of the study showed a significant correlation between skin adverse reactions of SJS,TEN and HLA-B*1502 gene,while proved no clear correlation between the MPE and HLA-B*1502. Conclusion The application of AEDs antiepileptic drugs for clinical treatment and the detection of HLA-B*1502 gene in advance can predict the skin adverse reactions in antiepileptic treatment.

[Key words] Aromatic Antiepileptic Drugs;Skin adverse reactions;HLA-B*1502;Anti-epileptic

12112癫痫（epilepsy）在临床上属于一种慢性脑部疾病，可以由多种原因诱发，主要的临床特征为脑神经元过度放电，进而出现反复性、发作性和短暂性的中枢神经系统功能失常[1]。临床多用抗癫痫药物进行治疗，如苯巴比妥、卡马西平、拉莫三嗪、苯妥英钠等，大部分属于芳香族药物（aromatic antiepileptic drugs，AEDs），一般需要长期或者终身服用，因此可以引发的较多不良反应如肝肾功能损害、精神及中枢神经抑制等[2]，尤其是对皮肤造成的

[基金项目] 广东省清远市社会发展领域自筹经费科技计划项目（2017B167）。

不良反应，如药物超敏综合反应（drug hypersensitivity syndrome，DHS）、中毒性表皮坏死松解症（toxic epidermal necrolysis，TEN）、Stevens-Johnson 综合征（SJS）以及轻度斑丘疹（MPE）等，引起该类不良反应主要是因为AEDs会在体内被酶，与患者体内的蛋白多肽形成半抗原复合物，而这种半抗原复合物属于常见的致敏原[3]。而文献中报道[4-6]，患者在服用AEDs时所产生的皮肤不良反应，与HLA-B*1502基因具有一定的相关性，但是一般的研究均针对的是一种药物进行了研究，不同的研究之间所使用的AEDs类药物不同，因此本研究选取了在我院就诊

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DNA如非当日使用，置于-20℃保存；使用完毕后剩余的DNA保存于-80℃备查。

1.2.3 样本检测 每一样本同时进行内部质控及样本检测两个的PCR反应，其试剂配置为：内部质控： PCR混合液12.5μL+内部控制基因混合液2.5μL+纯水8μL；标本检测：PCR混合液12.5μL+PG1502混合液2.5μL+纯水8μL。将2μL样本DNA加入至对应的检测管中，瞬时离心后转移至CFX-96荧光定量PCR仪上按以下条件进行扩增：95℃ 10min预变性，然后按95℃ 15s→71℃ 60s 35个循环进行扩增；荧光通道设置为SYBR，荧光信号收集设置在71℃ 60s结束时；结果判读：内部质控管CT值≤27，标本检测管CT值≤35，且标本检测管CT值-内部质控管CT值≤7时，判读为1502阳性；而标本检测管CT值-内部质控管CT值＞7时，或标本检测管CT值＞35时，则判读为1502阴性。1.3 统计学处理

采用统计学软件SPSS18.0对数据进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果

2.1 正常组与不良反应组比较

2.1.1 基本信息比较 对比分析正常组与不良反应发生组，两组治疗患者的性别、年龄、所使用药物之间的差异均无统计学意义（P＞0.05），证明在使用AEDs治疗各种病因诱发的抗癫痫患者时，以上因素与皮肤不良反应的发生情况无统计学上的相关性。分别对比分析MPE、SJS、TEN组，发现基本信息与未发生皮肤不良反应的组别差异均无统计学意义，除了TEN组的性别与正常组差异有统计学意义（χ2=6.542，P=0.011）。见表1。

的由多种病因诱发的癫痫患者，选用多种AEDs类药物进行治疗，在治疗期间通过监测其皮肤不良反应的发生情况并且检测患者的HLA-B*1502基因，从而分析皮肤不良反应与HLA-B*1502基因之间的相关性。1 资料与方法  1.1 一般资料

收集2015年4月～2017年10月由于多种原因诱发癫痫并在我院进行就诊治疗的患者581例为研究对象，男347例，女234例，平均年龄（52.1±16.8）岁，按照病情给予AEDs类药物进行治疗，如卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、苯妥英钠等。根据药物反应分为不良反应组和正常组，其中发生皮肤不良反应的患者有95例，其中男51例，女44例，平均年龄（51.5±16.6）岁；未发生皮肤不良反应的患者有486例，男296例，女190例，平均年龄（52.2±16.9）岁。在发生皮肤不良反应的患者中有MPE组49例，SJS组27例，TEN组19例。 1.2 仪器与方法

1.2.1 试验仪器 全血人基因组核酸提取纯化采用Lab-Aid 824核酸提取仪及其配套的Lab-Aid 824核酸提取Mini试剂盒，两者均由厦门致善生物科技股份有限公司提供；NanoDrop 2000 超微量紫外分光光度计由美国Thermo公司提供；“人类白细胞抗原 B 位点 1502 基因检测试剂盒”由世基生物医学股份有限公司 提供；CFX-96荧光定量PCR仪由美国Bio-Rad公司提供。

1.2.2 样本DNA提取 在提取试剂条椭圆形孔中加入混匀的全血标本200μL和1mol/L的DTT溶液30μL；将已加样的试剂条放置于试管架上放入核酸提取仪中，选取自动提取程序进行核酸提取；运行完毕后，用移液器吸取出核酸溶液合约350μL，用NanoDrop 2000 超微量紫外分光光度计进行DNA浓度及纯度分析，确保DNA含量＞10ng/μL，OD260/280在1.8～2.0之间。所提取的

表1  正常组与不良反应组基本信息比较

组别正常组不良反应组

MPESJSTEN

n48695492719

性别男2965130156*#

女19044191213*#

年龄（岁）52.2±16.951.5±16.650.9±17.051.8±17.052.6±16.0

药物

卡马西平120241374

奥卡西平1202212

拉莫三嗪1182212

苯妥英钠128271287

*#

注：表示TEN组与正常组比较，P＜0.05；表示TEN组与MPE组比较，P＜0.05

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2.1.2 HLA-B*1502基因比较 检测结果表明，发生皮肤不良反应的患者中有46例（48.4%）属于HLA-B*1502阳性，49例（51.6%）属于阴性，无皮肤不良反应的患者中只有19例（3.9%）属于阳性，而467例（96.1%）属于阴性，正常组与皮肤不良反应发生组之间HLA-B*1502基因阳性率差异有统计学意义（χ2=18.486，P＜0.01），说明皮肤不良反应与该基因具有明显的相关性。分别对比分析MPE、SJS、TEN组与正常组，结果表明MPE组不良反应的发生与HLA-B*1502基因之间的相关性并不明确，差异无统计学意义。而SJS组HLA-B*1502基因阳性率与正常组差异具有统计学意义（χ2=29.375，P＜0.01），TEN组HLA-B*1502基因阳性率与正常组差异也具有统计学意义（χ2=22.134，P＜0.01），提示SJS以及TEN皮肤不良反应的发生与HLA-B*1502之间具有明显的相关性。具体见表2。

表2  正常组与不良反应组HLA-B*1502基因比较[n（%）]组别正常组不良反应组

MPESJSTEN

n48695492719

HLA-B*1502阳性HLA-B*1502阴性

19（3.9）46（48.4）*2（4.1）27（100）*#17（.5）*#

467（96.1）49（51.6）47（95.9）

02（10.5）

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者（约80%）均来自发展中国家。我国作为第一大发展中国家，人口基数大，在医学上面临的癫痫现状严峻，约有900 万人患有癫痫，且这个数据每年以45万人的速率进行增长[7]。该疾病的发病机制主要是患者脑细胞群异常、超同步化放电，从而导致患者出现突发性、暂时性的脑功能紊乱，其临床主要表现为患者大脑无意识或者意识发生改变、局部或者全身的肌肉强直性或阵挛性的抽搐以及患者出现感觉异常。癫痫一般会出现反复发作的现象，给患者及家属造成了巨大的生活与经济压力，严重时可以直接导致患者死亡[8]。临床上对于癫痫的治疗主要是通过使用抗癫痫药物，临床上通过使用抗癫痫药物进行治疗，已经将80%的癫痫患者治愈或者将其病情进行了控制，抗癫痫药物因为在临床上作用显著，市场需求量大，因此一直在不断的发展，分别对化学结构等进行了改变，由于化学结构的不同，其发挥抗癫痫作用的机制也不一致，但是总体来说，该类药物一直在朝着增加疗效、降低不良反应的方向发展。我国目前使用的抗癫痫药物根据化学结构中是否含有芳香环，抗癫痫药又可以分为芳香族与非芳香族，芳香族主要包括苯巴比妥、苯妥英、卡马西平、奥卡西平等，非芳香族主要有托吡酯、左乙拉西坦等。

对于芳香族抗癫痫药而言，其疗效显著，副作用小[13]，因此在临床上得以广泛的推广使用。然而副作用虽然小，但是却是不可避免的，主要表现在皮肤、消化、心脏及神经等系统，在这其中，皮肤不良反应尤为显著[14]，如轻度斑丘疹（maculopapular eruptions，MPE）、StevensJohnson综合征（SJS）以及中毒性表皮坏死松解症（toxic epidermal necrolysis，TEN）等，在临床上发生率均较高，严重者可危及患者生命，有数据报道由于皮肤不良发应导致的死亡高达30%。因此，对芳香族抗癫痫药物的研究属于目前临床上的一个研究热点[15]，对于皮肤不良反应的研究显示，其关键的发病因素还没有研究清楚，多数研究者认为是免疫反应引起的，但是现在越来越多的研究也报道与遗传有关。2004年，中国学者研究显示CBZ导致的皮肤不良反应与HLA-B*1502存在强相关。而后有不少文献报道[9-12]，世界各地如中国、泰国等处人群中芳香族抗癫痫药物所诱发的皮肤不良反应与HLA-B*1502基因具有相关性，尤其是SJS、TEN等严重的皮肤不良反应。

本研究通过长时间的筛选患者作为研究对象，并对皮肤不良反应进行监测以及对患者HLA-B*1502基因进行检测，进行统计学分析得出的结果

*#

注： 表示与正常组比较，P＜0.05；表示与MPE组比较，P＜0.05

2.2 MPE组、SJS组、TEN组比较

2.2.1 基本信息比较 将MPE、SJS、TEN三种皮肤不良反应患者的基本信息进行两两对应分析，如表1所示，三组患者所使用药物、年龄之间的差异均无统计学意义，但是对于性别而言，MPE组与TEN组之间差异具有统计学意义（χ2=4.830，P=0.028），而MPE与SJS、SJS与TEN之间的差异也无统计学意义。见表1。

2.2.2 HLA-B*1502基因比较 将MPE、SJS、TEN三种皮肤不良反应患者的HLA-B*1502基因进行两两对应分析，如表2所示，MPE组与SJS组的HLA-B*1502基因阳性率差异具有统计学意义（χ2=28.931，P＜0.01），MPE组与TEN组的HLA-B*1502基因阳性率差异也具有统计学意义（χ2=21.149，P＜0.01），而对于SJS组与TEN组而言，该基因阳性率的差异无统计学意义。见表2。3 讨论

癫痫在临床上属于神经内科的常见疾病，目前全世界大约有5000万癫痫患者，而大多数癫痫患

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（收稿日期：2018-07-03）

大致与现有的文献报道结果一致，整体来说皮肤不良反应的发生与年龄、性别、所使用的芳香族药物没有明显的相关性，而与患者HLA-B*1502基因具有显著的相关性，而MPE这种轻微的皮肤不良反应与HLA-B*1502基因的相关性并不显著，可以认为该类不良反应与该基因没有较强的联系。而SJS与TEN不良反应的发生与该基因相关性显著，因此可以认为若患者携带有该基因，则在使用芳香族抗癫痫药物进行治疗时很可能会引起此严重不良反应，在临床用药时需要注意。值得注意，我们的研究结果与其他研究结果有所出入的一点是，TEN类严重皮肤不良反应的发生在我们的研究中与性别的差异具有统计学意义，如TEN与正常组对比，性别差异的P值为0.011（＜0.05），与MPE组相比，P值为0.028（＜0.05），而在现有的文献中报道，并没有出现与性别较强的相关性。分析可能是因为在我们的研究中，TEN组研究对象只有19例，例数较少，因此造成的统计学差异可能由于样本量较少引起，因此，该结果若需要进一步确认，则应该进一步进行研究，扩大样本量，也可以通过大量的文献研究，进行Meta分析，进行确认。此外，研究结果表明，即使HLA-B*1502基因呈现阴性的患者，在临床上有时也会发生TEN的严重皮肤不良发应。

从文献报道及我们的研究总结，我们可以确切的认为芳香族抗癫痫药在治疗癫痫疾病时，所造成的严重皮肤不良反应如SJS、TEN等确实与HLA-B*1502基因相关，因此，可以应用与临床，在使用该类药物进行治疗前，对患者的HLA-B*1502基因进行检测，从而提前预测患者是否会发生严重的皮肤不良反应，进而调整治疗方案，改变患者用药，或使用联合用药的方式抑制该类不良反应的发生，并且在临床上使用该药物时，若患者检测HLA-B*1502基因为阴性，也需要对患者进行实时监测，以免在发生严重不良反应如TEN时，因为较晚发现而出现恶化，延误病情。

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