两｛ 呻‘羞 ２ ７年第 Ｄ卷第 期 方 药．痿ｊ５｝分坼 黄芩根系中黄酮类成分测定与综合利用研究 陈煜娟’，孙裕 １甘肃省第二人民医院药剂科，甘肃兰州７３００３０；２兰州佛慈制药有限责任公司 ［摘要］目的：测定黄芩根系（根茎、主根、支根和毛根）中的黄酮类成分，了解在不同根系中的分布，为 综合利用提出依据。方法：建立ＨＰＬＣ法同时测定黄芩中四种黄酮类成分的测定方法，甲醇和０．１％磷酸为流动 相，进行梯度洗脱。结果：根茎、主根、支根和毛根中的黄芩苷含量分别４．２６％～７．２０％、１２．１９％ １４．４９％、１１．１２％ １５．７９％和８．７１％一１ １．３４％，汉黄芩苷和汉黄芩素主要分布在根茎和主根中，黄芩素各部位相近。结论：黄芩根系 中含有多种黄酮类成分，应该分别加以利用 ［关键词］黄芩；根系；黄酮；含量测定；综合利用 ［中图分类号］Ｒ９３２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００４－６８５２（２０ｌ７）０８－００１７－０３ Ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎＲｏｏｔＳｙｓｔｅｍ ｏｆＨｕａｎｇＱｉｎ ＣＨＥＮＹｕｊｕａｎ ，ＳＵＮＹｕ １ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｐｅｏｐｌｅ ５ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＧａｎｓｕ，Ｌａｍｈｏｕ ７３ＯＯ３Ｏ，Ｃｈｉｎｏ， ２ Ｌａｎｚｈｏｕ Ｆｏｃｉ Ｐｈｏｚｒｍｗｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，ＬＴＤ Ａｂ８ｔｒａｃｔ ０ｂｉｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｒａｉｓｅ ｔｈｅ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｂｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｒｏｏｔ ｓｙｓｔｅｍ（ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ，ｍａｉｎ ｒｏｏｔ ａｎｄ ｒｏｏｆｌｅＯ ｏｆＨｕａｎｇＱｉｎ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）ａｎｄ ｓｕｒｖｅｙｉｎｇ ｉｔｓ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｏｏｔ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｍｅ也ｏｄｓ：ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ＨｕａｎｇＱｉｎ，ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ０１％ｐｈｏｓｐｈｏｎｃ ａｃｉｄ ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ，ａｎｄ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：１１１ｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｆｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ，ｍａｉｎ ｒｏｏｔ，ｒｏｏｔｌｅｔ ａｎｄ ｈａｉｒ ｏｏｔ ｒｗｅｒｅ ４．２６％一７．２０％。 ｌ２．１９％～１４．４９％．１１．１２％～１５．７９％ａｎｄ ８．７１％～ｌ１＿３４％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ ａｎｄ ｗｏｇｏｎｉｎ ｍａｉｎｌｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ｈｅ ｔｏｏｔｓｔｏｃｋ ａｒｎｄ ｍａｉｎ ｒｏｏｔ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆｂａｉｃａｌｅｉｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｓｙｓｔｅｒｎ ｏｆＨｕａｎｇＯｉｎ，ａｎｄ ｈｅｙ ｔｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｕｔｉｌｉｚｅｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． 墨叼＇ｏ ＨｕａｎｇＱｉｎ；ｒｏｏｔ ｓｙｓｔｅｍ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｍｉｒｎａｔｉｏｎ；ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ 黄芩为唇形科植物黄芩Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉ— ｃａｌｅｎｓ ｉ Ｓ Ｇｅｏｒｇｉ的干燥根，具有清热燥湿，泻火 解毒，止血安胎等作用…。现代研究表明，黄芩中 度洗脱法分析了黄芩根系中４种黄酮类成分的含 量，以期为人工种植黄芩品种培育和合理利用黄 芩植物资源提供科学依据。 黄酮类化合物为其主要有效成分，其中含量较高 的有黄芩苷（ｂａｉｃａｌ ｉｎ）、汉黄芩苷（ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ）、 黄芩素（ｂａｉｃａｌｅｉｎ）、汉黄芩素（ｗｏｇｏｎｉｎ）和千层 纸素Ａ（ｏｒｏｘｙｌｉｎ Ａ）等［２］。黄芩药材和不同商品 规格的质量评价多以黄酮类成分为指标［３－５ ３，亦有 多糖成分的比较报道［６］。我国商品黄芩主产于甘 肃，２０１２年全省播种面积７．８万亩，为甘肃‘十大 陇药’’之一［７］。黄芩属于多年生草本植物，具有比 较发达的根系，人工栽培商品多采自２年或３ 年生的根，产地将主根加工商品供药用，而占根系 重量５％一２８％左右的侧根、须根产地一般弃去不 用，实际上造成很大的浪费。本研究采用ＨＰＬＣ梯 Ｉ仪器与试药 １．１仪器及试药美国Ｗａｔｅｒｓ ５１５泵，２４８７紫 外检测器，７１７自动进样器。Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｒ２００Ｄ型 分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。黄芩苷 （批号：ｌ１０７１５—２０１１ｌ７，含量以９１．７％计算）、汉黄 芩苷（批号：８８０—２００９０１，含量以９８．９４％计算）、黄 芩素（批号：ｌ１１５９５—２００６０１）、汉黄芩素（批号： １ｌ１５１４～２０１３０４）对照品由中国食品药品检定研究 院提供。甲醇为色谱纯（山东禹王实业禹城化工 厂，批号１７１４１０９），水为纯净水，其余试剂为分析纯。 １．２实验样品黄芩Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎ－ Ｓｉｓ Ｇｅｏｒｇｉ采集于甘肃省陇西县菜子镇，由兰州 ＿＼＼１ ７／广 方药．届量分衍 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｊｏｕｒｎｌａ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ２０１ ７ Ｖｏ１．３０ Ｎｏ．８ ，大学药学院马志刚教授鉴定。 汉黄芩苷５．４８ ｍｇ、黄芩素１０．８８ ｍｇ和汉 黄芩素５．３１ ｍｇ对照品，分别置２５ ｍＬ量 己方法与结果 ２．１ 不同黄芩根系与产量比较采挖２年生的栽培黄芩 后，对根系状况进行观察，主要有鸡爪系（约占２６％～３２９６）、 直根系（约占４２％～６２９６）和独根系（约占１６％ ２５％）３类根 系。分别取不同根系的黄芩４～５枝根，对其重量分别进行 称量，计算平均比例。见表ｌ。 表１ 黄芩不同根系重量分数和平均比例 瓶中，用甲醇配制成浓度分别为１５２、 ２ｌ９．２、４３５．２和２１２．４ Ｉｘｇ／ｍＬ的储备液。 取各对照品储备液适量，甲醇稀释配制 成不同浓度的标准工作曲线溶液。 ２．２．３供试品溶液的配制 分别称取 ６０℃干燥４小时的各种黄芩中粉约０．３ ｇ， 精密称定，加７５％乙醇４０ ｍＬ，加热回流 １小时，过滤，滤液置１００ ｍＬ量瓶中，用 少量７５９６乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液 并入同一量瓶中，加７５９６乙醇至刻线，摇 匀；精密量取溶液１ ｍＬ于ｌ０ ｍＬ量瓶中， 用７５％乙醇稀释至刻度线，既得。 注：“一”示没有此根系。 黄芩样品中，以鸡爪系计算，主根占黄芩根系的３１％一 ４３％，一歧分支根一般保留药用，占黄芩根系的１９％～３０％，二 歧分支根和毛根商品弃去不用，占黄芩根系的８％～２８％。直 根系中毛根占黄芩根系的３％～１１％。独根系中毛根占黄芩 根系的５％～８％。以２０１５年陇西县种植６万亩，亩产干货 １８５千克计算，按最低根系比例估计，大约４６万公斤的黄 芩根弃去，这是相当大的生物产量。 ２．２含量测定 ２．２．１ 色谱条件色谱柱：迪玛Ｃｌ８柱（２５０ ｍｍｘ４．６ ｍｉｌｌ， ５ ｍ）；流动相：甲醇为流动相Ａ，０．１％磷酸为流动相Ｂ，按 表２程序梯度洗脱；检测波长：２８０ ｎｍ；流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱 温：室温。理论板数：按黄芩苷峰计算应不低于３０００。见表２。 表２梯度洗脱 ２．２．４ 线性关系的考察精密吸取黄 芩苷对照品溶液（１５２ ｇ／ｍＬ）１０、２０、３０、 ４０和５０ ；精密吸取汉黄芩苷对照品 溶液（２．１９２）￣ｇ／ｍＬ）１、５、１０、１５和２０ ； 精密吸取黄芩素对照品溶液（８．７０４）￣ｇ／ｍＬ） ４、８、ｌ０、１２和１４ Ｌ；精密吸取汉黄芩素 对照品溶液（２．１２４￣ｇ／ｍＬ）１、５、ｌ０、２０和 ３Ｏ ，依次注入高效液相色谱仪，测定 峰面积，以对照品进样量（Ｘ）为横坐标， 峰面积积分值（Ｙ）为纵坐标，绘制标准曲 线，分别得回归方程为： 黄芩苷 Ｙ＝４．２７６ ４ｘ１０６－５．７２０ ８，ｒ＝０．９９９ ６ 汉黄芩苷Ｙ＝２．３１３ ２￣１０６－２５０ ０，ｒ＝０．９９９ ９ 黄芩素 Ｙ＝３．４４０ ８ｘ１０６－３７０．３７，ｒ＝０．９９９ ７ 汉黄芩素Ｙ＝６．７４４ ０ｘ１０６－２８１ ６９，ｒ＝０．９９９ １ 时间／ｍｉｎ ０～２５ 流动相Ａ／％ ４０—６０ 流动相Ｂ／％ ６０—４０ 结果表明黄芩苷进样量在１．５２￣７．６ ｇ、 ２５～３０ ３Ｏ～３５ ３５～４０ ４０￣４５ ４５～５５ ６０—７０ ７Ｏ一８Ｏ ８０—６Ｏ ６０—４０ ４０ ４０—３０ ３０—２ ０ ２Ｏ一４０ ４０—６Ｏ ６０ 汉黄芩苷进样量在０．００３～０．０４３ ｇ、黄 芩素进样量在０．０３５～０．１２２ ｐ，ｇ和汉黄 芩素进样量在０．００２～０．０６４ ｔｘｇ范围呈 良好的线性关系。见图１—２。 ２．２．２对照品溶液的配制 分别精密称取黄芩苷３．８０ｍｇ、 时间／ｍｉｎ 时间／ｍｉｎ 图１对照品溶液ＨＰＬＣ色谱图 图２样品溶液ＨＰＬＣ色谱图 中囤科技 ＼ Ｉ／一８／ 娃ｍ期刊 而鄙仲Ｉ羞 ２Ｄ ７年第３Ｄ卷第８期 ２．２．５精密度实验取同一批黄芩药材粉末，按“供试 方药．痿量分 工栽培的直根系（商品率６２％～７７％）、独根系 （商品率７４％～７６％）符合野生黄芩的商品规 格，生产中具有优势，因此优质高产黄芩品 品溶液的制备”方法制备，精密吸取１０ ，注入高效液 相色谱仪，重复进样５次，分别测量黄芩苷、汉黄芩苷、黄 芩素和汉黄芩素的色谱峰峰面积，结果ＲＳＤ分别为０．８９％、 １．５７％、２．１６％和２．７４％。结果表明仪器的精密度良好。 ２．２．６ 重复性实验取同一批黄芩药材粉末５份，按 “供试品溶液的制备”方法制备，精密吸取ｌ０ ，注入高 效液相色谱仪，测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩 素的含量，平均含量分别为６．４１６ ０％、０．１４６ ６％、０．５００ １％ 和０．０９０ ３％，ＲＳＤ分别为１．３７％、２．４６％、２．８５％和２．７６％。 种选育，是黄芩栽培技术的主要研究方 向。 本实验测定，不同根系的黄芩药材均 达到《中国药典２０１５年版》含黄芩苷不得 少于９．０％规定。不同根系中，黄芩苷主要 分布在主根部（含量１２．１９％ １４．４９％），侧 根和毛根也有较多的分布（含量８．０％以 结果表明此法重复性良好。 上）。汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素主要分 ２．２．７稳定性实验取同一批黄芩药材粉末，按“供试 布在根茎部位。黄芩产地加工弃去的根可 品溶液的制备”方法制备，于配制后０、２、４、６和１０小时 以作为黄酮类成分提取的原料加以利用。 进样，精密吸取１０ ，注入高效液相色谱仪，测定黄芩 鸡爪系商品产量较低，但各部位分布的黄 苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的色谱峰峰面积，结果 酮类成分含量较高，黄芩不同根系的产量 ＲＳＤ分别为０．７９％、１．１７％、２．４０％和２．６８％。表明样品溶液 与含量相关性有待进一步研究。 在１０小时内基本稳定。 人工药材的质量和质量评价受到许多 ２．２．８回收率实验取已知含量的黄芩药材粉末０．１５ ｇ， 因素的制约。现代药理学表明，黄芩各种成 精密称定。精密量取黄芩苷（９．４１６ ｍｇ／ｍＬ）、汉黄芩苷 分大多以协同作用来发挥药理药效作用。 （０．２１４ ５ ｍｇ／ｍＬ）、黄芩素（０．７５０ ５ ｍｇ／ｍＬ）和汉黄芩素 因此，以多种成分为指标，结合药材的外观 （０．１３０ ５ ｍｇ／ｍＬ）各ｌ ｍＬ，蒸干，加入样品。按供试品溶液 性状、产量及自然环境条件的适宜性，综合 的制备方法操作，测定其含量，并计算回收率，结果分别为 评价人工种植的黄芩药材更具科学性和实 ９８．４１％、１０２．７３％、１０３．０５％和１０３．４７％，ＲＳＤ分别为１．８６％、 用性。 ２．４６％和２．７１％。 参考文献 ２．２．９样品测定对三种根系的样品按“供试品溶液制 ［１】 国家药典委员会．中国药典［Ｍ］．北京：中国医药科 备”方法制备，精密吸取对照品与样品溶液各ｌＯ ，注 技出版社，２０１ ５：３０１—３０２． ［２］楼之岑，秦波．常用中药材品种整理和质量研究【Ｍ】． 入高效液相色谱仪，计算含量。见表３。 北京：中国协和医科大学出版社，１９９７：８３３—８４５． 表３ 黄芩根系中四种黄酮类成分含量测定 ％ ［３］于晶，陈君，尚新月，等．不同来源黄芩产量及质量 性状的比较研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，３０（７）： ４９１－４９４． ［４］林慧彬，李新秀，林慧群，等．我国不同种质黄芩的 质量比较研究ｆＪ】．北京中医药大学学报，２００８， ３１（４）：２７ ３－２７５． ［５］周锡钦，张庆英，梁鸿，等．黄芩中主要黄酮类成分 的含量分析【Ｊ］．中国中药杂志，２００９，５５（２２）：２７— ２９． ［６】林慧彬，路俊仙，陈兵，等．我国不同种质黄芩多糖 含量的比较研究［Ｊ］．中华中医药杂志，２０１０，２５（２）： ４５－４６． ［７］李盛华．打陇药优势之品牌，走中医药特色之路［Ｊ】 ＿西部中医药，２０１２，２ ５（２）：１－３． 注：“一”示没有此根系。 收稿日期：２ Ｏ１７－０１－２１ ］ ，Ｊ、结 作者简介：陈煜娟（１９７３一），女，主管中药师。研究 研究表明，黄芩药材个体质量有较大的差异［３－４］。我 方向：中药材质量分析及中草药炮制。 们从栽培２年生的样品中发现３种根系，不同黄芩根系 在产量有较大差异，预示黄芩存在丰富的种质多样性。人 １９／／Ｉ
