《细胞生物学实验》教学大纲

课 程 名 称：细胞生物学实验 英 文 名 称：Cellular biological experiment

课 程 编 号：14070101 实 验 课 性 质：非设课 课 程 负 责 人：张尚立 开放实验项目数：25

大 纲 主 撰 人：杨晓梅 曹慧仁 大 纲 审 核 人：张尚立

时永香 石 梅

一、学时、学分

课程总学时：54 实验学时：54 课程总学分：1.5 实验学分：1.5

二、适用专业及年级

生物科学、生物技术、生态学、生物工程和生命基地三年级

三、实验教学目的与基本要求

细胞生物学实验是为生命科学学院1～3年级各专业学生开设的实验课程，本实验课程的教学目标是：培养学生的基本实验技能，专业基础类实验能力及创新思维能力；训练学生依据实验方案能够自主完成实验项目。通过实验训练，使学生能够具有观察、比较、分析、专业基础类，实验动手，数据处理和书写实验报告、生物绘图、制表等方面的能力。

四、主要仪器设备

普通光学显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、复式光学显微镜及其摄影装置、电子显微镜、超薄切片机、冷冻切片机、石蜡切片机、制刀机、离心机、恒温箱、冰箱、培养箱、二氧化碳培养箱、恒温蜡箱、恒温水浴锅、解剖器械、超净工作台、组织捣碎机、分析天平、放大机、电热板、流式细胞仪、电泳仪、湿盒、细胞电泳仪、计算机、酶联免疫仪。

五、实验课程内容和学时分配 序 号 1 实验项目 名 称 细胞膜通透性试验 实 验 内 容 学时分配 3 实验属性 专 业 基 础 类 实验 类型 综 合 每组人数 2 实验要求 必 做 指导 教师 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开/未开 已开 1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律 2.了解溶血现象及发生机制 1

2 死活细胞的鉴别 1.掌握死活细 胞鉴别的原3 理及方法 2.掌握细胞计数的方法 3.了解类坏死现象的原理 1.了解细胞膜表面结构 2.测量凝集时间 3.镜下观察凝集细胞的形态 3 专业基础类 综 合 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 3 细胞凝集反应 专 业 基 础 类 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 4 显微放射自显影技术 1.试剂的配制 2.动物的注射6 方法 3.了射性同位素的基本知识 4.基本操作：掺入（标记）、样品制备、乳胶膜制备、曝光、显影、定影、染色、观察 1.掌握细胞器分离的一般原理和方法 2.学习差速离心法 3.熟悉荧光显微镜的使用 4.观察叶绿体的形态、自发荧光和次生荧光 3 综 合 2 选 做 已开 5 叶绿体的分离及荧光观察 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 2

6 小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察 1.观察活细胞内线粒体的形态、数量与分布 2.学习一些细胞器的超活染色技术 3.掌握各种具有专一性的活体染料 1.原代细胞培养 2.细胞传代培养 3.培养细胞的生长特征与形态分型 4.培养细胞的冻存、复苏技术 1.了解细胞融合的基本原理、类型和方法 2.掌握PEG诱导细胞融合的方法 1.掌握动物染色体标本制备的基本过程，了解操作步骤的原理 2.掌握常用动物染色体的数目及特点 3 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 7 细胞培养方法 6 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 8 细胞融合 3 专 业 基 础 类 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 9 动物染色体标本制备及观察 6 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 10 染色体核型分析 1.掌握人类染 色体的分组特3 征及核型分析方法 2.染色体显微镜分析（计数、分组） 3.染色体照相分析 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 3

11 巨噬细胞吞噬现象观察 1.了解细胞吞噬作用的过程及其意义 2.掌握小鼠腹腔给药和脊椎脱臼处死的方法 1.学会并掌握显微摄影装置及其操作技术 2.学会照片的拍摄、冲洗方法 1.光镜下的形态学观察 2.电镜形态学观察 3.DNA电泳 4.流式细胞仪检测 5.原位末端标记 1.试剂的制备 2.组织固定与包埋 3.支持膜的制作 4.玻璃刀的制作 5.切片 6.切片的染色 1.试剂的配制 2.熟悉PAS法原理及操作步骤 3.观察糖原在组织细胞中的分布 3 专 业 基 础 类 专 业 基 础 类 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 12 显微摄影术 3 综 合 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 13 各种因素诱导细胞凋亡及凋亡细胞的形态和生化特征观察 9 综 合 2 必 做 已开 14 透射电子显微镜样品制备 3 专 业 基 础 类 演 示 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 15 PAS法显示糖类 3 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 4

16 脂类细胞化学—苏丹III染色 1． 了解脂类 染色原理、3 操作步骤及脂类标本制片原则 2． 学会小白鼠的肠系膜铺片 1.熟悉Feulgen反应的原理及操作步骤 2.观察DNA的分布 1.了解过氧化物酶显示方法的原理、操作步骤 2.观察过氧化物酶的分布 1.熟悉甲基绿—派洛宁法显示核酸的原理及操作步骤 2.观察RNA、DNA在细胞中的分布 3.学会做血涂片 1.熟悉免疫细胞化学的原理及操作步骤 2.掌握免疫荧光法的原理及实验方法 3.学会荧光显微镜的原理及使用 1.学习光学显微镜显示联会复合体技术 2.观察光镜下联会复合体的形态结构 3 专 业 基 础 类 综 合 2 必 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 17 DNA的Feulgen反应染色法 18 过氧化物酶显示（色素形成法） 专 业 基 础 类 专 业 基 础 类 专 业 基 础 类 综 合 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 已开 3 综 合 2 必 做 19 甲基绿—派洛宁法显示RNA、DNA 3 综 合 2 必 做 已开 20 间接免疫荧光法显示中间纤维 3 专 业 基 础 类 综 合 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 21 联会复合体的染色及观察 3 专 业 基 础 类 5

综 合 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开

22 原位杂交 技术 1.了解原位分子杂交技术的原理及应用 2.掌握原位分子杂交的操作过程 1.细胞介质的制备 2.样品的制备 3.盐桥的制备 4.网格目微尺的校正 5.毛细管测量层的选择 6.电泳速度的测定 1.光镜下的形态学观察 2.电镜形态学观察 3.DNA电泳 4.流式细胞仪检测 5.酶联免疫仪检测 1.试剂配制 2.样品的取材、固定、脱水、浸蜡、包埋、修块、切片 3.切片的脱蜡及染色 3 专 业 基 础 类 专 业 基 础 类 综 合 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 23 细胞电泳 3 综 合 2 选 做 已开 24 抑制细胞增殖的有效成分的筛选 9 专 业 基 础 类 综 合 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开 25 石蜡切片及冰冻切片技术 3 专 业 基 础 类 演 示 2 选 做 张尚立 时永香 杨晓梅 石 梅 曹慧仁 已开

六、考核方式

根据细胞生物学理论及实验教学的要求，结合细胞生物学实验课程教学的特点，制定以下考核办法：

实验课考核的最终成绩，由平时成绩和期末考评组成，平时成绩占40%，

考试成绩占60%。

记分办法：

1. 实验课课堂表现：包括实验态度、操作技能，实验记录及实验结果。（10分）

2. 实验报告：要求实验报告书写规范，简明扼要，结果真实，对出现的问

6

题、现象能以科学态度分析，进行结果讨论。（20分）

3. 纪律卫生：不迟到、不旷课，不在实验室打闹、不大声喧哗。实验结束，认真整理实验室台面，值日生负责清扫实验室卫生，离开实验室前检查实验室水电安全情况。（10分）

期末考试：实验动手能力，实验设计能力和实验创造性能力检验，老师设计各种命题让学生抽签选择，学生根据命题要求回答、操作，给出考查成绩（60分）。

七、实验教科书、参考书

（一） 教科书

细胞生物学实验（第二版）， 杨汉民、刘玉章等，高等教育出版社，

1997.7

（二） 参考书

1、 细胞生物学实验，辛华等 科学出版社，2001.2

2、 细胞生物学实验指导，李素文主编，高等教育出版社，2001.10 3、 细胞生物学实验，李荫秦主编，北京大学出版社，1988.7 4、 细胞生物学实用方法与技术，章静波主编，北京医科大学中国协

和医科大合出版社，1995.8

5、

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