中药组合物、中药提取物的制备方法及其应用[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 109260259 A(43)申请公布日 2019.01.25

(21)申请号 201811368526.X(22)申请日 2018.11.16

(71)申请人 广州神农生物技术有限公司

地址 510000 广东省广州市高新技术产业

开发区科学城揽月路3号广州国际企业孵化器F区F323房(72)发明人 李莹雪　丁韵芸　陈嘉慧　李乾坤　

黄静贤　李紫薇　(74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理

事务所(普通合伙) 11371

代理人 宋南(51)Int.Cl.

A61K 36/537(2006.01)A61P 3/06(2006.01)A23L 33/105(2016.01)

权利要求书1页 说明书14页 附图7页

A61K 35/62(2006.01)

CN 109260259 A(54)发明名称

中药组合物、中药提取物的制备方法及其应用

(57)摘要

中药提取物的制备本发明涉及中药组合物、

方法及其应用，中药组合物，由1-9重量份的丹参、1-3重量份的西洋参、1-3重量份的三七、0.2-1.2重量份的地龙提取物组成，中药提取物的制备方法，包括取1-9重量份的丹参、1-3重量份的西洋参、1-3重量份的三七，提取得到提取物，再与0.2-1.2重量份的地龙提取物混合的步骤，本发明通过大量对比试验发现，采用丹参、西洋参、三七和地龙提取得到的提取物相对于其他中药成分制得的提取物采用低剂量、中剂量或高剂量均对于高血脂模型具有非常显著的治疗作用，可以有效且显著地降低血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。

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权　利　要　求　书

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1.一种中药组合物，其特征在于，由1-9重量份的丹参、1-3重量份的西洋参、1-3重量份的三七、0.2-1.2重量份的地龙提取物组成。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，由3-5重量份的丹参、1-2重量份的西洋参、1-2重量份的三七、0.3-0.6重量份的地龙提取物组成。

3.一种中药提取物的制备方法，其特征在于，包括取1-9重量份的丹参、1-3重量份的西洋参、1-3重量份的三七，提取得到提取物，再与0.2-1.2重量份的地龙提取物混合的步骤。

4.根据权利要求3所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述丹参、所述西洋参、所述三七是通过加热回流的方式进行提取的。

5.根据权利要求4所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述回流提取的具体步骤包括：

取丹参、西洋参或三七放入醇溶剂中加热回流，滤过，收集滤液，浓缩，得到醇提浸膏；收集滤渣加水煎煮，滤过，收集滤液，浓缩，得到浸膏；将所述醇提浸膏和所述浸膏混合，得到丹参、西洋参或三七提取物。6.根据权利要求5所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述醇溶剂的浓度为85％-100％，所述醇溶剂的投加量为丹参、西洋参或三七的重量的4-8倍，所述水的投加量为丹参、西洋参或三七的重量的6-10倍。

7.根据权利要求5所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述加热回流的时间为1-5h，所述煎煮的时间为1-5h。

8.根据权利要求3所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述地龙提取物是通过以下步骤制备得到：取地龙浸泡于水中，超声提取，过滤，取滤液干燥，得地龙提取物。

9.一种权利要求1或2所述的中药组合物或权利要求3-8任一项所述的中药提取物的制备方法制备得到的中药提取物在降血脂药物及保健食品中的应用。

10.一种权利要求1或2所述的中药组合物或权利要求3-8任一项所述的中药提取物的制备方法制备得到的中药提取物在预防和/或治疗心脑血管疾病的药物及保健食品中的应用。

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中药组合物、中药提取物的制备方法及其应用

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技术领域

[0001]本发明涉及保健品技术领域，具体而言，涉及中药组合物、中药提取物的制备方法及其应用。

背景技术

[0002]心脑血管疾病是心脏血管和脑血管疾病的统称，泛指由于高脂血症、脂血症、血液粘稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。心脑血管疾病是一种严重威胁人类健康的常见病，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点，即使应用目前最先进、完善的治疗手段，仍可有50％以上的脑血管意外幸存者生活不能完全自理，全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。心脑血管疾病开始时都是由心脑血管或经络淤阻而引起的。[0003]心脑血管疾病严重危害人们的身体健康，可是目前尚没有治疗高脂血症、脂血症等心脑血管疾病具有很好疗效的药物。

发明内容

[0004]鉴于上述问题，本发明提供了一种中药组合物、中药提取物的制备方法及其应用。[0005]为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：[0006]一种中药组合物，由1-9重量份的丹参、1-3重量份的西洋参、1-3重量份的三七、0.2-1.2重量份的地龙提取物组成。[0007]在一些优选的实施方式中，由3-5重量份的丹参、1-2重量份的西洋参、1-2重量份的三七、0.3-0.6重量份的地龙提取物组成。

[0008]本发明还提供了一种中药提取物的制备方法，包括取1-9重量份的丹参、1-3重量份的西洋参、1-3重量份的三七，提取得到提取物，再与0.2-1.2重量份的地龙提取物混合的步骤。

[0009]在一些优选的实施方式中，所述丹参、所述西洋参、所述三七是通过超声提取、超临界萃取、微波提取、浸渍法提取、加热回流、渗漉法的方式之一进行提取的。[0010]在一些优选的实施方式中，所述丹参、所述西洋参、所述三七是通过加热回流的方式进行提取的。

[0011]在一些进一步优选的实施方式中，所述回流提取的具体步骤包括：[0012]取丹参、西洋参或三七放入醇溶剂中加热回流，滤过，收集滤液，浓缩，得到醇提浸膏；

[0013]收集滤渣加水煎煮，滤过，收集滤液，浓缩，得到浸膏；[0014]将所述醇提浸膏和所述浸膏混合，得到丹参、西洋参或三七提取物。[0015]在一些优选的实施方式中，所述醇溶剂的浓度为85％-100％，所述醇溶剂的投加量为丹参、西洋参或三七的重量的4-8倍，所述水的投加量为丹参、西洋参或三七的重量的6-10倍。

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在一些优选的实施方式中，所述加热回流的时间为1-5h，所述煎煮的时间为1-5h。

[0017]在一些优选的实施方式中，所述地龙提取物是通过以下步骤制备得到：取地龙浸泡于水中，超声提取，过滤，取滤液干燥，得地龙提取物。

[0018]本发明还提供了一种如上所述的中药组合物或如上所述的中药提取物的制备方法制备得到的中药提取物在降血脂药物中的应用。

[0019]本发明还提供了一种如上所述的中药组合物或如上所述的中药提取物的制备方法制备得到的中药提取物在预防和/或治疗心脑血管疾病的药物中的应用。[0020]下面对本发明的优点或原理进行说明：[0021]本发明涉及中药组合物、中药提取物的制备方法及其应用，中药组合物，由1-9重量份的丹参、1-3重量份的西洋参、1-3重量份的三七、0.2-1.2重量份的地龙提取物组成，中药提取物的制备方法，包括取1-9重量份的丹参、1-3重量份的西洋参、1-3重量份的三七，提取得到提取物，再与0.2-1.2重量份的地龙提取物混合的步骤，本发明通过大量对比试验发现，采用丹参、西洋参、三七和地龙提取得到的提取物相对于其他中药成分制得的提取物采用低剂量、中剂量或高剂量均对于高血脂模型具有非常显著的治疗作用，可以有效且显著地降低血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，所以该中药组合物和中药提取物可以用于降血脂药物和预防和/或治疗心脑血管疾病的药物。[0022]为使本发明的上述目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合所附附图，作详细说明如下。附图说明

[0023]为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

[0024]图1是配方筛选试验TC对比图，其中，aa P<0.01(VS空白组)，！！P<0.01(VS模型对照组)，++P<0.01，+P<0.05(VS对比提取物I’组)，--P<0.01(VS地龙提取物组)；[0025]图2是配方筛选试验TG对比图，其中，bb P<0.01(VS空白组)，@@P<0.01(VS模型对照组)，//P<0.01(VS对比提取物I’组)，\\\\P<0.01(VS地龙提取物组)；[0026]图3是配方筛选试验HDL-C对比图，其中，cc P<0.01(VS空白组)；##P<0.01(VS模型对照组)，>P<0.01,>P<0.05(VS地龙提取物组)；[0027]图4是配方筛选试验LDL-C对比图，其中，dd P<0.01(VS空白组)；$P<0.05，$$P<0.01(VS模型对照组)，￥P<0.05，￥￥P<0.01(VS对比提取物I’组)，＝P<0.05(VS地龙提取物组)；

[0028]图5是组分成分筛选试验TC对比图，其中，aa P<0.01(VS空白组)，！P<0.05，！！P<0.01(VS模型对照组)，％％P<0.01(VS对比提取物I’组)；[0029]图6是组分成分筛选试验TG对比图，其中，bb P<0.01(VS空白组)，@P<0.05，@@P<0.01(VS模型对照组)，^^P<0.01(VS对比提取物I’组)；[0030]图7是组分成分筛选试验HDL-C对比图，其中，cc P<0.01(VS空白组)，##P<0.01(VS模型对照组)，&P<0.05(VS对比提取物I’组)；

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图8是组分成分筛选试验LDL-C对比图，其中，dd P<0.01(VS空白组)，$P<0.05,$$P

<0.01(VS模型对照组)，*P<0.05(VS对比提取物I’组)；

[0032]图9a是正常组的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0033]图9b是模型组的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；

[0034]图9c是FFA+非诺贝特的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0035]图9d是FFA+对比提取物I’的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0036]图9e是FFA+中药提取物I的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0037]图9f是FFA+对比提取物II’的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0038]图9g是FFA+对比提取物III’的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0039]图9h是FFA+对比提取物IV’的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0040]图9i是FFA+对比提取物V’的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0041]图9j是FFA+对比提取物VI’的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0042]图10a是正常组的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；[0043]图10b是模型组的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；

[0044]图10c是FFA+非诺贝特的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；[0045]图10d是FFA+对比提取物I’的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；[0046]图10e是FFA+中药提取物I的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；[0047]图10f是FFA+对比提取物II’的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；图10g是FFA+对比提取物III’的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；[0048]图10h是FFA+对比提取物IV’的油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图；[0049]图10i是FFA+对比提取物V’的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；[0050]图10j是FFA+对比提取物VI’的油红O染色观察LO2细胞内脂滴图；[0051]图11是组分比例试验TC对比图，其中，aa P<0.01(VS空白组)，bb P<0.01(VS模型对照组)；

[0052]图12是组分比例试验TG对比图，其中，CC P<0.01(VS空白组)，DD P<0.01(VS模型对照组)；

[0053]图13是组分比例试验HDL-C对比图，其中，AA P<0.01(VS空白组)；B P<0.05，BB P<0.01(VS模型对照组)；

[0054]图14是组分比例试验LDL-C对比图，其中，@@P<0.01(VS空白组)，##P<0.01(VS模型对照组)。

具体实施方式

[0055]如本文所用之术语：“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。[0056]连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后

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时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。

[0057]当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。[0058]“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.6g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之。[0059]“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。

[0060]本发明提供了一种中药组合物，其特征在于，由1-9重量份的丹参药材、1-3重量份的西洋参药材、1-3重量份的三七药材、0.2-1.2重量份的地龙提取物组成，所述丹参药材可以取1、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0重量份等，所述西洋参药材可以取1、1.5、2.0、2.5、3.0重量份等，所述三七药材可以取1、1.5、2.0、2.5、3.0重量份等，所述地龙提取物可以取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2重量份等。[0061]丹参：味，苦。性，微寒。入心、脾二经。基源为唇形科植物丹参Salviamiltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。本品功善活血祛瘀，性微寒而缓，能祛瘀而不伤正；既能活血又能清热凉血、养血以安神定志；通理骨筋关节、四肢不遂；祛瘀以生新，疗风而散结，性平而走血；破积聚症坚，止血崩带下；脚痹软能健，辟精魅鬼祟；养正祛邪，功同四物汤；走及奔马，行血之良品。[0062]西洋参：性，甘。味，微苦、凉。归心、肺、肾、脾经。基源为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根。均系栽培品，秋季采挖，洗净，晒干或低温干燥。本品能补益元气、养阴清热生津；且还能补肺气、心气，益脾气，并兼养心阴、肺阴，滋脾阴。[0063]三七：性，甘。味，微苦、温。归肝、胃经。基源为五加科植物三七Panax notoginesng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根茎。秋季花开前采挖，洗净，分开主根、支根及根茎，干燥。支根习称“筋条”，根茎习称“剪口”。本品具有活血祛瘀、补血生血疗效。本品能够缩短出血和凝血时间，具有抗血小板聚集及溶栓作用；能够促进多功能造血干细胞的增值，具有造血作用；能够降低心肌耗氧量和氧利用率，扩张脑血管，增强脑血流量。[00]地龙：基源为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum(E.Perrier)、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen的干燥体。前一种习称“广地龙”，后三种习称“沪地龙”，广地龙春季至秋季捕捉，沪地龙夏季捕捉，及时剖开腹部，除去内賍和泥沙，洗净，晒干或低温干燥。地龙蛋白：对纤维蛋白和凝血块均有溶解作用，能够促进人体血液循环，溶解血栓，达到清除血液垃圾，保健养生的功效。

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本产品以中医药理论为指导，结合现代科学研究成果。从整体上把握高血脂、心脑

血管产生的机理，采取“活血养血，益气养阴清热”的配方原则。用中药复方达到辅助降血脂、预防与治疗心脑血管疾病的作用。本发明与现有的预防和治疗心脑血管疾病的药物相比，通过补气养血、活血化瘀、软化血管三步完成，从而形成了一种见效快、疗效好的调节心脑血管疾病的中药组合物。[0066]第一步：润肺补气。充分发挥西洋参的滋阴、润肺、补气功能。血液有了动力，才能消除心慌、胸闷、心悸、头晕等症状，才能对症治疗，这是“养血”的前提。[0067]第二步：强心泵血。充分发挥丹参恢复心脑血管肌肉功能，软化血管，恢复心肌弹性，养护心脑的功能，这是“养血”的基础。[0068]第三步：健脾生血。充分发挥三七活血化瘀的作用，促进气血生化，新鲜血液不断再生，这是“养血”的源头。[0069]由此可见，本发明的调节心脑血管疾病的中药组合物与现有的同类产品相比，具有君臣佐使各种药材通过补气、养血同调，进行人体全面的修复的优势。[0070]本发明还提供了中药提取物的制备方法，包括取1-9重量份的丹参药材、1-3重量份的西洋参药材、1-3重量份的三七药材提取得到提取物再与0.2-1.2重量份的地龙提取物混合的步骤。所述丹参药材、所述西洋参药材、所述三七药材可各自通过加热回流的方式进行提取，所述回流提取的具体步骤包括：取丹参药材、西洋参药材或三七药材放入醇溶剂中加热回流，滤过，收集滤液，浓缩，得到醇提浸膏；收集滤渣加水煎煮，滤过，收集滤液，浓缩，得到浸膏；将所述醇提浸膏和所述浸膏混合，得到丹参、西洋参或三七提取物。[0071]所述醇溶剂的浓度为85％-100％，具体如85％、88％、90％、95％、100％等，所述醇溶剂的投加量为丹参药材、西洋参药材或三七药材的重量的4-8倍，具体如4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8倍等，所述水的投加量为丹参药材、西洋参药材或三七药材的重量的6-10倍，具体如6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10倍等。所述加热回流的时间为1-5h，具体如1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5h等，所述煎煮的时间为1-5h，具体如1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5h等。[0072]为了节省时间，可以将丹参药材、西洋参药材和三七药材混合，得到三者的混合物放入醇溶剂中加热回流，滤过，收集滤液，浓缩，得到醇提浸膏；收集滤渣加水煎煮，滤过，收集滤液，浓缩，得到浸膏；将所述醇提浸膏和所述浸膏混合，得到丹参、西洋参及三七三者的混合提取物。

[0073]所述地龙提取物是通过以下步骤制备得到：取地龙浸泡于水中，超声提取，过滤，取滤液干燥，得地龙提取物。

[0074]本发明还提供了一种如上所述的中药组合物或如上所述的中药提取物的制备方法制备得到的中药提取物在降血脂药物中的应用。

[0075]本发明还提供了一种如上所述的中药组合物或如上所述的中药提取物的制备方法制备得到的中药提取物在预防和/或治疗心脑血管疾病的药物中的应用。[0076]实施例1：

[0077]地龙提取物的制备：准备新鲜的地龙4kg，先用清水洗涤，用0.9％的生理盐水浸泡4小时中间隔1小时换水一次，让其吐出肚子里的脏物，淌干水份，干重为825g，按重量比加入10倍地龙重量的水进行超声提取，过滤提取液，喷雾干燥得205g干物质，即为地龙提取物。后续对比例中使用的地龙提取物为本实施例中制备的地龙提取物。

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丹参、西洋参、三七提取物的制备：取丹参药材、西洋参药材、三七药材筛选，去除

杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材300g、西洋参药材100g及三七药材100g混合得到混合物，用8倍混合物重量的乙醇(浓度为95％)加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到三种中药的提取物200g。

[0079]称取制备得到的地龙提取物6g与上述得到的三种中药的提取物40g混合，得到中药提取物I。

[0080]实施例2：

[0081]地龙提取物的制备：取50g地龙药材，按重量比加入10倍地龙重量的水进行超声提取，过滤提取液，喷雾干燥得地龙提取物12.5g。[0082]丹参、西洋参、三七提取物的制备：取丹参药材、西洋参药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材100g、西洋参药材100g、及三七药材100g混合得到混合物，用8倍混合物重量的乙醇(浓度为95％)加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到三种中药的提取物120g。

[0083]称取制备得到的地龙提取物5g与上述得到的三种中药的提取物30g混合，得到中药提取物II。

[0084]实施例3：

[0085]地龙提取物的制备：取干重为50g的地龙，按重量比加入10倍地龙重量的水进行超声提取，过滤提取液，喷雾干燥得地龙提取物12.5g。[0086]丹参、西洋参、三七提取物的制备：取丹参药材、西洋参药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材200g、西洋参药材100g、三七药材100g得到混合物，用8倍混合物重量的乙醇(浓度为95％)加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到三种中药的提取物160g。[0087]称取制备得到的地龙提取物7.5g与上述得到的三种中药的提取物40g混合，得到中药提取物III。[0088]实施例4：

[00]地龙提取物的制备：取干重为100g的地龙，按重量比加入10倍地龙重量的水进行超声提取，过滤提取液，喷雾干燥得地龙提取物25g。[0090]丹参、西洋参、三七提取物的制备：取丹参药材、西洋参药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材250g、西洋参药材100g、三七药材100g得到混合物，用8倍混合物重量的乙醇(浓度为95％)加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提

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液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到三种中药的提取物180g。[0091]称取制备得到的地龙提取物10g与上述得到的三种中药的提取物45g混合，得到中药提取物IV。

[0092]实施例5：

[0093]地龙提取物的制备：取干重为80g的地龙，按重量比加入10倍地龙重量的水进行超声提取，过滤提取液，喷雾干燥得地龙提取物20g。[0094]丹参、西洋参、三七提取物的制备：取丹参药材、西洋参药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材400g、西洋参药材200g、三七药材100g得到混合物，用8倍混合物重量的乙醇(浓度为95％)加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到三种中药的提取物280g。[0095]称取制备得到的地龙提取物15g与上述得到的三种中药的提取物70g混合，得到中药提取物V。

[0096]实施例6：

[0097]地龙提取物的制备：取干重为100g的地龙，按重量比加入10倍地龙重量的水进行超声提取，过滤提取液，喷雾干燥得地龙提取物25g。[0098]丹参、西洋参、三七提取物的制备：取丹参药材、西洋参药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材500g、西洋参药材300g、三七药材100g得到混合物，用8倍混合物重量的乙醇(浓度为95％)加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到三种中药的提取物360g。[0099]称取制备得到的地龙提取物20g与上述得到的三种中药的提取物90g混合，得到中药提取物Ⅵ。

[0100]实施例7：

[0101]地龙提取物的制备：取干重为120g的地龙，按重量比加入10倍地龙重量的水进行超声提取，过滤提取液，喷雾干燥得地龙提取物30g。[0102]丹参、西洋参、三七提取物的制备：取丹参药材、西洋参药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材700g、西洋参药材200g、三七药材200g得到混合物，用8倍混合物重量的乙醇(浓度为95％)加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到三种中药的提取物440g。[0103]称取制备得到的地龙提取物22.5g与上述得到的三种中药的提取物110g混合，得到中药提取物Ⅶ。[0104]实施例8：

[0105]地龙提取物的制备：取干重为200g的地龙，按重量比加入10倍地龙重量的水进行

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超声提取，过滤提取液，喷雾干燥得地龙提取物50g。[0106]丹参、西洋参、三七提取物的制备：取丹参药材、西洋参药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材900g、西洋参药材300g、三七药材200g得到混合物，用8倍混合物重量的乙醇(浓度为95％)加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到三种中药的提取物混合物560g。

[0107]称取制备得到的地龙提取物30g与上述得到的三种中药的提取物140g混合，得到中药提取物Ⅷ。

[0108]需要说明的是，在上述实施例1-8中，为了节省时间是将丹参、西洋参和三七三种药材混合同时进行提取，在其他实施例中也可以将这三种药材分别进行提取得到单种药材的提取物，也是在本发明所要求的保护范围之内。[0109]对比例1：

[0110]取实施例1制备得到的三种中药的提取物40g，即为对比提取物I’。[0111]对比例2：

[0112]取天麻药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取80g，用8倍重量95％乙醇加热回流提取1h，滤过，取滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.21的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到天麻提取物。

[0113]称取天麻提取物6g与实施例1中制备得到的三种中药的提取物40g混合，得到对比提取物II’。

[0114]对比例3：[0115]丹参、黄芪、三七提取物的制备：取丹参药材、黄芪药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取丹参药材300g、黄芪药材100g、三七药材100g，用8倍重量的95％乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.20的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到丹参、黄芪、三七三种提取物混合物215g。[0116]取丹参、黄芪、三七提取物100g，加入14g实施例1制备得到的地龙提取物，混合，得到对比提取物III’。[0117]对比例4：[0118]取丹参药材、三七药材筛选，去除杂质，再将药材切片，称取丹参药材300g、三七药材100g，用8倍重量95％乙醇加热回流提取1小时，滤过，滤液减压回收至适量，得到醇提浓缩液，备用。提取后的药渣加10倍水煎煮两次，每次半个小时，滤过，合并两次水提液，滤液浓缩至适量，与上述醇提浓缩液合并，浇于淀粉表面，真空干燥，得到提取物160g，加入实施例1中制备得到的地龙提取物30g，混合，得到对比提取物IV’。[0119]对比例5：

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取黄芪药材筛选，去除杂质，再将药材切片，然后称取28g，用8倍重量95％乙醇加

热回流提取1小时，滤过，取滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.21的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到黄芪提取物11g，加入实施例1中制备的三种中药的提取物40g、地龙提取物6g，混合，得到对比提取物V’。[0121]对比例6：[0122]取丹参药材、西洋参药材、三七药材、当归药材、泽泻药材筛选，去除杂质，再将药材切片，再称取丹参药材90g、西洋参药材30g、三七药材30g、当归药材30g、泽泻药材30g，用8倍重量的95％乙醇加热回流提取1小时，滤过，取滤液减压回收至相对密度为0.93的醇提浸膏，备用。过滤得到的滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，再去滤渣加10倍重量水煎煮0.5h，滤过，收集得到水提液，合并两次水提液，水提液浓缩至相对密度为1.21的浸膏，与上述醇提浸膏混合，真空干燥，得到提取物80g，加入实施例1制备得到的地龙提取物9g，混合，得到对比提取物VI’。[0123]一、动物高血脂模型试验-配方筛选[0124]实验原理：用高胆固醇和脂类饲料喂养动物可形成脂代谢紊乱动物模型，再给予动物受试样品或同时给予受试样品，可检测受试样品对高脂血症的影响，并可判定受试样品对脂质的吸收、脂蛋白的形成、脂质的降解或排泄产生的影响。[0125]实验动物：昆明小鼠，雌雄各半，体重18-22g，购于南方医科大学实验动物中心。[0126]髙脂饲料制备：15％猪油、1.2％胆固醇、0.2％胆酸钠、20％蔗糖、2％酪蛋白粉、61.6％基础饲料。[0127]主要试剂：总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒、阳性对照药物：脂必妥。[0128]实验方案：选健康昆明小鼠70只，随机分出10只作为正常组，其余60只小鼠饲以高脂饲料，正常饮水，造模14d，模型成功后，随机分成6组，分别为：模型对照组、阳性药对照组(给药量为0.35g/kg)、对比提取物I’组(给药量为1.14g/kg)、地龙提取物组(给药量0.05g/kg)、中药提取物I低剂量组(给药量为0.38g/kg)、中药提取物I中剂量组(给药量为0.76g/kg)、中药提取物I高剂量组(给药量为1.14g/kg)，给药方式为灌胃给药，正常对照组和模型组给同重量的水，每天上午1次，连续30d，取血测定各实验小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)指标。[0129]统计方法：GraphPah Prism(Ver.5,GraphPad Software)作图。SPSS19.0软件进行处理数据，所有数据以均数±标准差表示

均数多组间比较用单因素方差分析

(one-way ANOVA)，两组间比较用t检验。方差齐性时各组间两两比较采用LSD检验，方差不齐时采用Dunnett’s T3检验，P＜0.05，P＜0.01有统计学意义。[0130]辅助降血脂功能结果判定依据：依《保健食品检验与评价技术规范》“辅助降血脂功能检验方法”，在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇三项指标检测中血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品辅助降血脂功能动物实验结果阳性。[0131]结果分析：由试验结果可以看到，TC、TG、HDL-C、LDL-C模型组、实验组与空白组比较具有显著性差异(P<0.05)，表明此次动物高血脂模型建立成功。从实验结果数据分析，中

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药提取物I在低、中、高三个不同剂量上的给药效果随着剂量的增高而表现越显著，其中TC、TG、LDL-C在中、高剂量上表现非常显著(P<0.01)，表明该样品在此剂量上对本高血脂模型具有非常显著的治疗作用；对比提取物I’与中药提取物I的高剂量为同浓度的给药量，从实验检测指标TC、TG、HDL-C、LDL-C检测结果判断，中药提取物I对高血脂模型的效果优于对比提取物I’与地龙提取物。

[0132]表1配方筛选试验结果

[0133]

二、动物高血脂模型试验-组分成分筛选

[0135]实验动物、髙脂饲料制备、主要试剂：与上一试验一致。[0136]实验方案：选健康昆明小鼠100只，随机分出10只作为正常组，其余90只小鼠饲以高脂饲料，正常饮水，造模14d，模型成功后，随机分成9组，分别为：模型对照组、阳性药对照组(0.35g/kg)、对比提取物I’组(0.76g/kg)、中药提取物I中剂量组(0.76g/kg)、对比提取物II’(0.76g/kg)、对比提取物III’(0.76g/kg)、对比提取物IV’(0.76g/kg)、对比提取物V’(0.76g/kg)、对比提取物VI’(0.76g/kg)，给药方式为灌胃给药，正常对照组和模型组给同重量的水，每天上午1次，连续30d，取血测定各实验小鼠TC，TG，HDL-C，LDL-C指标。[0137]结果分析：由试验结果可以看到，TC、TG、HDL-C、LDL-C模型组、实验组与空白组比较具有显著性差异(P<0.05)，表明此次动物高血脂模型建立成功。从实验结果数据分析，TC指标中，实验组与模型组对比，具有显著作用(P<0.05)的有中药提取物I、对比提取物I’、对比提取物II’、对比提取物III’、对比提取物IV’、对比提取物V’，其中中药提取物I、对比提取物III’、对比提取物V’具有非常显著作用(P<0.01)；TG指标中，实验组与模型组对比，具有显著作用(P<0.05)的有中药提取物I、实对比提取物III’、对比提取物V’，其中中药提取物I具有非常显著作用(P<0.01)；HDL-C指标中，实验组与模型组对比，中药提取物I具有非常显著(P<0.01)；LDL-C指标中，实验组与模型组对比，具有显著作用(P<0.05)的有中药提取物I、对比提取物II’、对比提取物IV’、对比提取物V’，其中，中药提取物I、对比提取物II’具有非常显著作用(P<0.01)；综上所述，实验药物Ⅲ中剂量组与多个组方样品在TC、TG、HDL-C、LDL-C指标检测结果上与模型组对比，均体现出非常显著(P<0.01)；因此，从本次实施例实验结果判断，中药提取物I的组方为最优组方。[0138]表2组分成分筛选试验数据

[0134]

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三、MTT毒性试验

[0141]不同组方制备样品对LO2细胞和HepG2细胞的影响。取生长状态良好的LO2细胞和HepG2细胞，用10完全培养基接种于96孔板，于37℃饱和湿度的5％CO2细胞培养箱中培养24h后，小心吸干净细胞培养基，加入配置好的不同浓度药物，药物用含有1.5mM FFA和1％BSA的DMEM培养基进行稀释。药物分组：对比提取物I’、中药提取物I、对比提取物II’、对比提取物III’、对比提取物IV’、对比提取物V’、对比提取物VI’，24h后吸尽细胞培养基，按100μL/孔加入配制好的0.5mg/mL MTT溶液，置37℃培养箱中孵育，4h后吸出MTT溶液，加入200uL DMSO混匀，用酶标仪检测570nm波长处的OD值，并计算几种成分及提取物的IC10值及IC5值，用于后续实验。[0142]计算方法：

[0143]存活率(fu)＝1-(OD570-OD630)药物组/(OD570-OD630)对照组[0144]抑制率(fa)＝1-存活率(fu)

[0145]给药剂量与细胞存活率关系式为Y＝a+bX[0146]其中Y为存活率，X为给药剂量。通过实验可以测得药物给药时不同给药剂量对应的细胞存活率。将给药剂量和细胞存活率数据代入上述方程，对该组数据进行线性拟合，计算出对应的a值、b值，即得到对应于该药物的剂量与存活率关系的方程Y＝a+bX，从而求出给药细胞的IC10值及IC5值。[0147]实验结果如表3、表4、表5、表6所示，通过MTT细胞毒性实验，计算各实验药物的IC5值及IC10值，根据该实验结果为下一个试验：肝细胞脂肪堆积模型及油红O染色试验，提供给药浓度，以此保证在样品最大浓度作用下不损伤细胞正常生长，导致实验误差。

[0148]

[0140]

表3不同样品在不同浓度对HEPG2脂肪模型细胞的影响(抑制率％，)

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[0150]

[0151][0152]

表4不同样品在不同浓度对LO2脂肪模型细胞的影响(抑制率％，)

[0153][0154]

表5由表3数据计算HEPG2脂肪模型细胞不同样品IC5/IC10值(ug/ml)

[0155][0156]

表6由表4数据计算LO2脂肪模型细胞不同样品IC5/IC10值(ug/ml)

四、肝细胞脂肪堆积模型及油红O染色试验

[0158]HLP一般包含高胆固醇、高甘油三酯血症及混合型高血脂症，当脂肪摄入过多而肝脏无法及时有效地处理脂肪时，会导致肝脏中脂肪过载，从而引发脂肪肝。建立体外人肝癌细胞HepG2和人正常细胞LO2肝脂肪堆积模型，考察本发明申请中不同药物组方对两种细胞的抗高血脂作用。

[0159]实验细胞株：人正常干细胞LO2细胞株(广州吉塞生物科技股份有限公司)；人肝癌细胞HepG2细胞株(广州吉塞生物科技股份有限公司)。

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分别取生长状态良好的L02及HepG2细胞，用完全培养基制备成5×104/m L单细胞

悬液，接种至24孔板中。24h后小心吸干净细胞培养基，加入配置好的不同浓度药物，药物用1.5mM FFA进行稀释，置5％CO2培养箱中37℃孵育。24h后小心吸干净细胞培养基，用PBS洗涤后加入4％多聚甲醛室温固定，吸弃多聚甲醛，用PBS洗涤3遍，加油红O工作液，室温孵育15min。弃去油红O染色液，用PBS洗涤3遍，加复染液，室温孵育3min。弃去复染液，PBS洗涤3遍，每次5min，显微镜下拍照观察脂滴大小及数量。[0161]得到试验结果如图9-10，图9是油红O染色观察HepG2细胞内脂滴图，图10是油红O染色观察LO2细胞内脂滴图，图9中图9a为正常组，图9b为模型组，图9c为FFA+非诺贝特，图9d为FFA+对比提取物I’，图9e为FFA+中药提取物I，图9f为FFA+对比提取物II’，图9g为FFA+对比提取物III’，图9h为FFA+对比提取物IV’，图9i为FFA+对比提取物V’，图9j为FFA+对比提取物VI’，图10中图10a为正常组，图10b为模型组，图10c为FFA+非诺贝特，图10d为FFA+对比提取物I’，图10e为FFA+中药提取物I，图10f为FFA+对比提取物II’，图10g为FFA+对比提取物III’，图10h为FFA+对比提取物IV’，图10i为FFA+对比提取物V’，图10j为FFA+对比提取物VI’，图9和图10的放大倍数为400倍，由图9和10可以看出，L02细胞和Hep G2细胞空白组边界清楚，细胞完整，细胞间隙较小，核大呈蓝色，红色的脂滴在细胞上几乎不可见。1.5mM FFA刺激24h后，L02细胞和Hep G2细胞轮廓变圆，细胞间间距变大，胞浆内均呈现不同程度的颗粒状脂滴被染成鲜红色，呈密集环状分布在细胞膜外，表明肝脂肪堆积细胞模型成功建立。

[0162]阳性药物组与2种细胞的模型组比较，细胞内脂滴数目减少也较为明显，表明阳性药物能够对抗FFA诱导的肝脂肪堆积，抑制细胞内脂滴的形成。安全浓度范围内，实验药物Ⅲ与模型组比较，细胞内脂滴数量也明显减少，且优于其他实验药物组，依此，判断中药提取物I降脂效果良好。[0163]五、组分比例试验[01]实验动物：昆明小鼠，雌雄各半，体重18-22g，购于南方医科大学实验动物中心。[0165]髙脂饲料制备：15％猪油、1.2％胆固醇、0.2％胆酸钠、20％蔗糖、2％酪蛋白粉、61.6％基础饲料。[0166]主要试剂：总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒、阳性对照药物：脂必妥。[0167]实验方案：选健康昆明小鼠80只，随机分出10只作为正常组，其余70只小鼠饲以高脂饲料，正常饮水，造模14d，模型成功后，随机分成7组，分别为：模型对照组、阳性药对照组(给药量为0.35g/kg)、中药提取物I组(给药量为0.76g/kg)、中药提取物II组(给药量为0.76g/kg)、中药提取物III组(给药量为0.76g/kg)、中药提取物IV组(给药量为0.76g/kg)中药提取物V组(给药量为0.76g/kg)，给药方式为灌胃给药，正常对照组和模型组给同重量的水，每天上午1次，连续30d，取血测定各实验小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)指标。[0168]统计方法：GraphPah Prism(Ver.5,GraphPad Software)作图。SPSS19.0软件进行处理数据，所有数据以均数±标准差表示(x±s)，均数多组间比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)，两组间比较用t检验。方差齐性时各组间两两比较采用LSD检验，方差不齐时采用Dunnett’s T3检验，P＜0.05，P＜0.01有统计学意义。

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实验结果：如图11-14及表7所示，从实验结果数据分析，中药提取物I、II、III、IV、

V在此剂量上对本动物高血脂模型均具有显著作用，证明本中药提取物组合物在高血脂模型具有明显治疗效果。表7组分比例试验结果

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图1

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