染色备及显带常用试剂

1、 进口肝素管 NH Sodium Heparin

肝素具有抑制细菌作用，肝素含量过多时可抑制淋巴细胞的转化。

2、 秋水仙素

浓度为20μg/ml 用量：每瓶培养基用35μl秋水仙素

秋水仙素具有特异性地破坏纺锤丝的形成，阻抑中活动，从而使细胞停滞于中期。

秋水仙素的浓度不够或处理时间不足，可造成相少；相反浓度过高或处理时间过长，可使染色体过于缩短或发生异常现象，甚至染色体断裂。

3、 低渗液

0.075mol/LKcl溶液=2.794gKcl粉+500ml双（三）蒸水【使用前应37℃恒温水浴箱平衡】。 低渗处理可使细胞体积胀大【红细胞破裂，淋巴细胞膨胀】、染色体松散。

低渗处理时间过长时，细胞膜往往过早破裂，染色体丢失；低渗处理不够，染色体分散不佳，有细胞胞浆蓝色背景。

4、 固定液

甲醇：冰乙酸=3：1混合（临用现配）

冰醋酸固定液具有膨胀、固定作用，它与醇类混合固定，有利于染色体松散，可获得分散好，易于分析的中期染色体标本。标本固定不充分，如固定液不新鲜或甲醇、冰醋酸的质量不佳，结果染色体模糊或残留胞浆痕迹，使背景不清。

5、 胰酶（现配为佳）

0.2g胰酶粉+100mlHank液→摇匀调PH值7~7.2（常用0.1mol/LNaOH与0.1mol/LHcl调节PH）【使用前应37℃恒温平衡】胰酶消化蛋白。

胰酶的浓度、PH值、胰酶液温度和作用时间，直接影响G显带，带纹是否清晰可辨。 1】、胰酶液的温度偏高，反应速度就快，反之反应速度慢，将配好的胰酶放入水浴箱，37℃平衡15min左右，使胰酶染色缸温度保持在37±0.5℃； 2】、胰酶处理时间一般在染色后，镜下观察。如果细胞呈蓝紫色显不出带纹，说明胰酶作用时间不够；如果染色体边缘发毛或染色体之间连成一片，数不清单条染色体，染色体不规则或形成空泡状说明胰酶作用时间太长；如果细胞的色泽为桃红色，高倍镜下观察，染色体的带纹清晰可辨，说明胰酶的作用时间适当； 3】、标本片龄越长，对胰酶处理的抵抗性越长；片龄太长的标本，分带后往往不会出现带纹，而是斑点状染色体，烤片温度太高，带纹不清楚，烤片时间和温度不够带纹发毛； 4】、胰酶染色缸要洗干净，用蒸馏水冲2次，除去溶液中二价阳离子； 5】、胰酶PH值偏高，玻片偏蓝；

6、 Hank液（g/L）

Nacl 8.00g Kcl 0.40g Cacl2 0.14g MgSO4-7H2O 0.20g Na2HPO4 0.06g KH2PO4 0.06g NaHCO3 0.35g 葡萄糖 1.00g 酚红 0.02g

7、 Giemsa使用液

蒸馏水：麦氏缓冲液：Leihman染液=7：13：7

可在染色体纵轴上显示出着色深、浅相间的横纹——带，表明每条染色体的特征。

染色时间短，着色不够，深浅带反差小；时间过长，着色深，亦影响带纹反差，不易识别。

8、 麦氏缓冲液

麦氏缓冲液=蒸馏水：Miclvaine’s储存液：甲醇=91：6：1

9、Miclvaine’s储存液 原料：

1】 磷酸氢二钠(NaHPO4-12H2O) 分子量328 2】 柠檬酸（C6H8O7） 分子量210.14 3】 去离子超纯水 4】 甲醇 配制：

1、 A:0.2M NaHPO4液（71.6g+1000mlH2O）

B:0.1M 柠檬酸（21.014g+1000mlH2O） 2、375mlA+125mlB

3、用1N Hcl或1M NaOH调节PH至6.8 4、贴标签

10、Miclvaine’s冲洗液

1、2820mlH2O+180ml Miclvaine’s储存液 2、贴标签

11、Miclvaine’s染色液

1、2730mlH2O+180ml Miclvaine’s储存液+30ml甲醇 2、贴标签

12、培养试剂

RPMI-10培养液：RPMI-10=10.4g；肝素=80mg ；PHA=182mg；胎牛血清=100ml；抗菌素=8万单位；NaHCO3=2g；双蒸水定容至1000ml、PH 7.2抽滤除菌，分装-20℃保存待用。 常用培养液配方比例如下： RPMI-10 8ml

胎牛血清 2ml PH 7.2，平均分装于2个链霉素小瓶中，每瓶5ml（常用于外周血淋巴细胞培养） PHA 0.4ml 双抗 0.1ml

培养基PH值一般掌握在PH7.2~7.4，PH偏酸，影响淋巴细胞转化，使细胞发育不良或相很少，染色体分散差。而影响核型分析；偏碱细胞固缩，同样影响核型分析。

13、植物血凝素（PHA）【用于外周血】

可刺激处于G0期的小淋巴细胞转化为淋巴母细胞，由于淋巴母细胞具有能力，可以重新进入细胞增值周期进行有丝能力，在PHA作用下，经过体外培养数小时，细胞相增多。 PHA提取法：

20g菜豆→水洗→蒸馏水洗3次→去皮→40℃烤干→磨成粉+0.85%Nacl 500ml→摇匀→4℃48h常摇动→3000r/m 20min菜豆浸液离心→取上清液抽滤除菌分装，0℃以下保存。用量：0.2ml PHA/5ml培养基。 PHA对淋巴细胞的作用有着明显的个体差异，有时尽管培养的各种条件相同，但不同个体之间，相的多少，染色体的分散和形态。有很大差别，PHA的质量和浓度是淋巴细胞体外培养成败的关键。因此，不但要考虑它的效价，还要考虑它的浓度和质量。

0.143 mol/L NaHPO4=19.4g NaHPO4粉+1000mlH2O 0.057 mol/L KH2PO4=1.77g KH2PO4粉+1000mlH2O

染色体工作液=22ml KH2PO4+27ml NaHPO4+7.5ml Giemsa

Leishman储存液=0.8gSigma+500ml甲醇→2h磁力搅拌→37℃ 72h 染色液=24ml 麦氏缓冲液+16ml H2O+14ml Leishman储存液