中国现代医生２０１５年１月第５３卷第２期 ・医疗器械与设备・ ＡＢＩ ７５００与ＴＬ ９８８实时荧光ＰＣＲ仪的性能评价 潘强龙 周成林 杨先知 谢国良 崔大伟 １．江苏省宿迁市第一人民医院检验科，江苏宿迁２２３８００；２．浙江大学医学院附属第一医院检验科，浙江杭州３１０００３ 【摘要】目的探讨ＡＢＩ ７５００与ＴＬ ９８８荧光定量ＰＣＲ仪之间的性能差异。方法参照ＥＰ９一Ａ２文件中的评价标 准，两台仪器分别对５种不同浓度的甲型流感病毒阳性质控品进行检测．每个浓度测量２０次．比对两种仪器的 精密度、灵敏度，并评价两台仪器结果一致性。结果精密度：ＴＬ ９８８的变异系数（ＣＶ）从０．６８％到１．５２％，ＡＢＩ ７５００的ＣＶ从１．９３％到２．６９％。两台仪器在检测高浓度的甲型流感病毒ＤＮＡ时（１０ 、１０ 、１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）异无统 计学意义（Ｐ＞０．０５），检测低浓度的病毒ＤＮＡ时（１ｏ４、１０，ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）￣异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。灵敏度：两种仪 器检测浓度１０３ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ时，ＴＬ ９８８阳性检出率为１００％，ＡＢＩ ７５００检出率为０。两种仪器检测数据相关性良 好（ｒ＝Ｏ．９９８）。结论荧光定量ＴＬ ９８８ ＰＣＲ仪器的性能（精密度和灵敏度）比ＡＢＩ ７５００好。 【关键词】荧光定量ＰＣＲ仪；比对；精密度；灵敏度；一致性 【中图分类号】Ｒ４４６．１ 【文献标识码】Ｂ 【文章编号】１６７３—９７０１（２０１５）０２—０１５５—０２ Ｅｖａｌｕａｔｉ０ｎ ０ｆ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＡＢＩ ７５００ ａｎｄ ＴＬ ９８８ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｒｅ． ａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＰＡＮ Ｑｉａｎｇｌｏｎｆ ＺＨＯＵ Ｃｈｅｎｇｌｉｎ ＹＡＮＧ Ｘｉａｎｚｈｉ ＸＩＥ Ｇｕｏｌｉａｎｆ ＣＵＩＤａｗｅｉ １．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｕｑｉａｎ Ｃｉｔｙ ｉｎ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｓｕｑｉａｎ ２２３８００， Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｔｏ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｉｎ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１０００３，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＡＢＩ ７５００ ａｎｄ ＴＬ ９８８ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ｆｏｒ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ ＥＰ９－Ａ２ Ｆｉｌｅｓ，ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｏｆ ｆｉｖｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｆｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ａｎｄ ｅａｃｈ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ２０ ｔｉｍｅｓ．Ｔｈｅ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎｎｅｒ ｇｒｏｕｐ ＣＶ ｏｆ ＴＬ ９８８ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０．６８％ｔｏ １．５２％．Ｔｈｅ ＣＶ ｆｏｒ ＡＢＩ ７５００ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ １．９３％ｔｏ ２．６９％． Ｔｈｅ ｈｉｇｈ（１０ ，１０６，ｌｏ５ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＩＦＶＡ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＡＢＩ ７５００ ａｎｄ ＴＬ ９８８ ｉｎｓｔｕｍｅｎｔｒｓ， ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ（Ｐ＞Ｏ．０５）ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｌｏｗ（１０４，１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅ— ｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＡＢＩ ７５００ ａｎｄ ＴＬ ９８８ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｒｅｓｕｈｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｗｈｅｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ １０ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ １００％ｗｉｔｈ ＴＬ ９８８ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，ｂｕｔ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ０ ｗｉｔｈ ＡＢＩ ７５００ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ＡＢＩ ７５００ ａｎｄ ＴＬ ９８８ ｗａｓ ｂｅｔｔｅｒ（ｒ＝ ０．９９８）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｓ ｉｎ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＴＬ ９８８ ＰＣＲ ｉｎｓｔｕｍｅｎｔｒ ａｒｅ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ＡＢＩ ７５００ ＰＣＲ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ＰＣＲ；Ｃｏｎｔｒａｓｔ；Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ；Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ；Ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ 根据ＩＳＯ １５１８９要求，实验室需要定期对使用的 仪器进行性能评估，当实验室使用两套及以上检测系 统检测同一项目时，应比对数据表明其检测结果一致 １材料与方法 １．１材料 （１）主要仪器：ＡＢＩ ７５００和ＴＬ ９８８荧光定量ＰＣＲ （２）试剂：上海之江生物科技有限公司提供的甲 型流感病毒荧光定量ＰＣＲ检测试剂盒。检测标本：阳 性。现笔者按ＥＰ９一Ａ２文件要求【 ，对美国ＡＢＩ ７５００ 仪、生物安全柜、低温高速离心机、超净工作台等。 和国产ＴＬ ９８８的主要性能指标进行评估，以了解结 果差异性与一致性，从而寻找国产仪器可替代国外产 品的可能性。 【基金项目】“十二五”国家科技重大专项（２０１２ＺＸ１０００４— ２１０） 性定量质控品（含甲型流感病毒ＤＮＡ的浓度为１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ），用ｆｒｅｅ Ｈ２０准确１Ｏ倍比稀释成１０６，１０ｓ，１０４、 １０ ｃｏｐｉｅｄｍＬ，充分混匀，分装２５０ Ｌ到１．５ ｍＬ的ｅｐ— 通讯作者 ｐｅｎｄｏｒｆ管中备用。 ＣＨＩＮＡ ＭＯＤＥＲＮ ＤＯＣＴＯＲ Ｖｏ１．５３ Ｎｏ．２ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１ ５臁 ・医疗器械与设备・ 中国现代医生２０１５年１月第５３卷第２期 １．２方法 ７５００的检出率为０。灵敏度方面，ＴＬ９８８要比ＡＢＩ １．２．１精密度测定按ＮＣＣＬＳ标准，分别在ＡＢＩ ７５００ ７５００能检测到更低浓度，即灵敏度相对较高（Ｐ＜ 和ＴＬ ９８８荧光定量ＰＣＲ仪上同时检测１０ 、ｌ０ 、ｌ０ 、 １０４ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ四种浓度的阳性质控品。各浓度均测定 ０．０５）。 ２．３ 目关性比较 ２０次，计算其均值、标准差和变异系数。 五个浓度标本在两台ＰＣＲ仪上进行检测．根据阳性 检测率分析其灵敏度。 两台仪器对各标本的甲型流感病毒ＤＮＡ的含量 程为：ｙ＝１．２３６４ｘ一５．２０９７（ｒ＝０．９９８），具有良好的直线相 １．２．２灵敏度测定分别取１０ 、１０ 、ｌ０ 、１０ 、１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ 进行测定，结果表明，两台仪器测定值的回归直线方 关和回归关系。 １．２－３相关性检测通过重复性试验中的数据，分别取 １Ｏ 、１Ｏ 、１０ 、１０４ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ浓度的检测结果的平均值， 分析两台仪器的数据相关性。 １．３统计学方法 ３讨论 在２０１３年全球高科技产业值中，精密仪器医疗设 备约为３万亿美金，占１３％。而精密医疗设备基本上被 国外所垄断。医疗设备是现代医疗业发展的必备手段， 动民族品牌企业不断发展，降低老百姓就医费用成本。 荧光定量ＰＣＲ技术是通过荧光染料或荧光标记 的特异性探针对ＰＣＲ产物进行标记跟踪．实时监控 应用ＳＰＳＳ １７．０统计学软件对数据分析处理 检 性关系分析采用直线相关及回归分析。Ｐ＜０．０５为差异 有统计学意义。 ２结果 查是否有离群值，对数据进行初步检查，两变量间线 所以需要加快精密仪器的国有化进程，降低成本，推 反应过程。与传统的ＰＣＲ技术相比，实时荧光定量技 术具有特异性高等优点［６－８］，在检测甲型流感病毒上具 有很好的准确性。 ２．１两台仪器精密度结果比较 ＴＬ ９８８和ＡＢＩ ７５００两台荧光ＰＣＲ仪器的精密 度结果比较，见表１。可以看出ＴＬ ９８８测得各浓度数 据的变异系数（ＣＶ）从０．６８％到１．５２％，ＡＢＩ ７５００测得 各浓度数据的变异系数（ＣＶ）是从１．９３％到２．６９％．变 ７５００的精密度略低于ＴＬ ９８８（Ｐ＞０．０５）。此外，关于相 另外实验室中不应使用同一种检测系统进行临 床检验，以避免仪器出现系统性的检测错误［９－ 。对样 本进行检测时，一般只做一次检验便要发出报告。这 器的精密度具有很高的要求【１２＿ ４１。实验室中，当样本在 低拷贝状态下也要求有很高的检出率。 异系数（ｃｖ）均在要求范围内（＜ｌ０％），数据表明ＡＢＩ 便要求仪器检测系统具有良好的可重复性，因此对仪 同浓度的标准品检测结果的Ｃｔ值和标准差分析．显 示两台ＰＣＲ仪的批内重复性均良好。 表１ 两台仪器精密度结果比较 两台仪器在试验前，室内质控品的检测结果均可 靠，具有较好的重复性，此次试验中，两台仪器未出现 故障，稳定性良好，操作方便，检测快速。对ＡＢＩ ７５００ 荧光定量ＰＣＲ仪在重复性、线性、灵敏度上与ＴＬ ９８８ 进行比较，结果显示两台ＰＣＲ仪的批内批间重复性 好，ＣＶ均在要求范围内，线性良好。ＡＢＩ ７５００在精密 度和灵敏度上明显略逊于ＴＬ ９８８．可能与本次试验中 所用试剂与国产ＴＬ ９８８更配套，致使ＴＬ ９８８在本次 试验中表现优异。两台仪器测定值比较，ｒ＝Ｏ．９９８，表明 两台仪器具有良好的直线相关和回归关系。说明 ＡＢＩ ７５００与ＴＬ９８８测定甲型流感病毒的结果具有可 比性，而国产ＴＬ ９８８ ＰＣＲ仪能较好地服务于临床。 【参考文献】 ２．２两台仪器灵敏度结果比较 ［１】张秀明，李炜煊，郑松柏，等．不同检测系统１７项常规 生化结果的比对和偏倚评估［Ｊ］．检验医学，２００７，２２（２）： １６６－１７０． 甲型流感病毒ＤＮＡ的浓度在１０＼１０￣１０５．１０４ｃｏｐｉｅｓｉｎＬ 时，两台仪器的阳性检出率均为１００％，当浓度为 １０ ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ时，ＴＬ ９８８检出率依然为１００％，但ＡＢＩ ＣＨＩＮＡ ＭＯＤＥＲＮ ＤＯＣＴＯＲ Ｖｏ１．５３ Ｎｏ．２ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１ ５ （下转第１６０页） ‘・ 综 述】 。・ 中国现代医生２０１５年１月第５３卷第２期 ［１６】王斌，萱垣异，李杰芬．灵芝多糖对小鼠脾脏树突状细 刘冬舟，刘翠莲，洪小平，等．雷公藤内酯醇对系统性 胞的增殖作用［Ｊ］．免疫学杂志，２００６，１６（５）：２９１—２９２． 红斑狼疮患者树突状细胞Ｔｏｌｌ样受体一９表达的影响【Ｊ１． ［１７］孙丽华，赵明耀，黄幼田，等．灵芝孢子粉对荷瘤小鼠 实用医学杂志，２０１１，２７（１１）：１９１１－１９１３． 树突状细胞的影响及其抗瘤效应ｆＪ１．山西医药杂志， 周英武．人参皂苷Ｒｇｌ对树突状细胞效应与分子机制 ２００６，３５（８）：６９８－７００． 的研究［Ｄ】．北京中医药大学，２０１ １． 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