ＤＯＩ：１０．１３９９５／ｊ．ｃｎｋｉ．１１—１８０２Ｉｔｓ．０１４３４１ １株植物乳杆菌发酵豆粕产有机酸的研究 毛银，邹宗胜，邓禹 （江南大学，粮食发酵工艺与技术国家工程实验室，江苏无锡，２１４１２２） 摘 要 从发酵豆粕中筛选得到１株生长迅速产酸量大的乳酸菌，经鉴定为植物乳杆菌，命名为ＪＵＮ—ＤＹ－６，利 用该菌对豆粕进行固态发酵。通过高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）对发酵豆粕中的有机酸组成进行了定性定量分析。 结果显示：用ＪＮＵ—ＤＹ．６生产的发酵豆粕中主要有６种有机酸，其中以乳酸、乙酸、丙酸和柠檬酸为主。且发酵豆 粕工艺中糖蜜的添加与否对发酵豆粕中丙酸含量影响较大。碱性蛋白酶添加量０．５％，糖蜜添加量为３％的条 件下发酵豆粕，产生有机酸含量峰值为１４．６４６ ｇ／Ｌ，比仅使用乳酸菌发酵的情况下提高了２３．１％。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ 凝胶电泳结果显示，发酵豆粕中的大豆蛋白基乎完全降解为小分子多肽。 关键词 植物乳杆菌；发酵豆粕；发酵工艺；有机酸 豆粕是畜禽最重要的植物性蛋白源，其粗蛋白含 １株从发酵豆粕中分离的生长迅速，产酸量高的植物 乳杆菌，不仅大大减少了蛋白酶的使用量，还缩短了 发酵周期，提高了发酵豆粕的质量。 量高，营养丰富并有较平衡的氨基酸组成。在饲料发 酵中，乳酸菌被公认为是最传统、最安全的发酵菌种， 并被称为益生菌 。用乳酸菌发酵豆粕，乳酸菌能 进一步降解，并把有效蛋白质作为营养源，产生生物 活性肽 ，发酵产生各种有机酸，导致ｐＨ降低 。 有机酸已经广泛用作畜禽（尤其是猪）的饲料添 加剂。有机酸可直接参与机体能量、结构和酶促反 应 。 ，作为一种高效率的能量来源，有机酸可减少 因糖异生和脂肪分解造成的组织损耗，从而提高营养 １ 材料与方法 １．１ 菌株 植物乳杆菌ＪＮＵ－ＤＹ一６，从发酵豆粕中分离纯化 得到，由本实验室保藏。 １．２主要试剂 ＣＨ３ＣＯＯＮａ、Ｋ２ ＨＰＯ４、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２ Ｏ、ＭｎＳＯ４‘ 物质消化率，促进生产性能发挥；可降低胃肠道ｐＨ 值，减缓胃的排空速度，改变肠道内微生物区系，抑制 病原菌的繁殖，减少胃肠毒素的产生，同时促进益生 菌繁殖 ‘ 。另外柠檬酸、乳酸和甲酸等有机酸一方 面可直接刺激口腔味蕾，使唾液分泌增多，增强食 欲 ；另一方面，由于其具有芳香味，可掩盖不良 ７Ｈ Ｏ、ＣａＣＯ 、柠檬酸氢二铵：分析纯，上海国药集团。 豆粕来源于丰益（上海）生物技术研发中心有限公 司；放线菌酮，上海生工（Ｓａｎｇｏｎ）；ＳＤＳ—ＰＡＧＥ凝胶制 备试剂盒，北京索莱宝科技有限公司（Ｓｏｌａｒｂｉｏ）。 １．３培养基 ＭＲＳ培养基（ｇ／Ｌ）：蛋白胨１０．０，牛肉浸取物 １０．０，酵母提取液５．０，葡萄糖５．０，ＣＨ ＣＯＯＮａ ５．０， 气味，起调味作用，从而改善饲料的适口性，促进仔猪 采食，加快生长… 。丙酸具有良好的防止饲料发霉、 的作用。 柠檬酸氢二铵２．０，吐温８０ １．０，Ｋ２ＨＰＯ４ ２．０，ＭｇＳＯ４・ ７Ｈ：Ｏ ０．２，ＭｎＳＯ ・７Ｈ：Ｏ ０．０５，ｐＨ ６．２～６．４，分离培养 基：在ＭＲＳ固体中添加２％ＣａＣＯ 。 １．４主要仪器与设备 发酵豆粕的核心是降解大分子蛋白，使豆粕中的 大分子蛋白降解为多肽、小肽和游离氨基酸等小分 子。本研究通过添加一定量的碱性蛋白酶来确保大 隔水式电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂； 分子蛋白的完全降解，在改进发酵工艺的同时采用了 第一作者：硕士研究生（邓禹教授为通讯作者，Ｅ—ｍａｒｌ：ｄｅｎｇｙｕ＠ ｊｉａｎｇｎａｎ，ｅｄｕ．ｃｎ）。 基金项目：国家自然科学基金（３１５０００７０）；江苏省自然科学基 金青年基金（ＢＫ２０１５０１３６） 收稿日期：２０１７—０３—２０，改回日期：２０１７～０５—２３ ＨＹＧ．ＩＩ空气恒温摇床，上海欣蕊自动化设备有限公 司；高压蒸汽灭菌锅，上海实业有限公司医疗设 备厂；ＵＶｍｉｎｉ １２４０紫外分光光度计，日本ＳＨＩＭＡＤ－ ＺＵ公司；ＰＬ２００２电子天平，ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯＬＩＤＯ公司； ５８０４Ｒ冷冻离心机，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；５４２４台式高速离 心机，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；高效液相色谱仪，Ｈｉｔａｃｈｉ公司； ！生蔓 鲞差 塑（璺差 塑２ｌ ４３ ＦＯＯＤ ＡＮＤ ＦＥＲＭＥ ＴＡＴＩＵＮ ＩＮＤＵＳＴＲＩＥＳ 基因扩增仪（Ｃ１０００ＴＭ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ），Ｂｉｏ－Ｒａｄ公 司；ＤＹＹ－６Ｃ型电泳仪，Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司；ＧｅｌＤｏｃ凝胶成 像仪，Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司。 １．５实验与方法 １．５．１ 乳酸菌的富集 将发酵豆粕以１００ ｇ／Ｌ的接种量接种于添加了 放线菌酮（５０￣ｇ／ｍＬ）的ＭＲＳ液体培养基中，２００ ｒ／ ａｒｉｎ，３７℃培养４８ ｈ，连续增殖２～３次。 １．５．２ 乳酸菌的分离纯化 取一定量的富集菌液，用无菌生理盐水逐级稀 释，涂布于已经制备好的分离培养基（含２％的碳酸 钙）平板上，其上再覆盖一层同样的培养基，夹层厌 氧培养（３０ ｏＣ，４８ ｈ），然后挑选溶钙圈大的单菌落， 在分离培养基上多次划线分离纯化得到纯培养物经 鉴定为植物乳杆菌，并命名为ＪＵＮ—ＤＹ一６。 １．５．３ 菌株的生长曲线的测定 挑取单菌落接种于ＭＲＳ液体培养基中２００ ｒ／ ｍｉｎ，３７ ｏＣ恒温摇床培养过夜作为种子液待用。取 ２．５ ｍＬ菌悬液于４５ ｍＬ ＭＲＳ培养基中（５％的接种 量），３７℃２００ ｒ／ｍｉｎ恒温培养。用分光光度计测量 ＯＤ值，跟踪菌种生长情况。选用６００ ｎｍ波长，以蒸 馏水做参比，开始培养前测定种子的ＯＤ值作为起 点，开始培养后，每隔４ ｈ测定１次，每次测量３组数 据做对照。处理ＯＤ鲫值，绘制该菌生长曲线图。 １．５．４发酵豆粕 将风干的豆粕、水、糖蜜、碱性蛋白酶以及对数期 的植物乳杆菌菌液按不同的的配比混合均匀后置于 经无菌处理的自封袋中，封口置于３７℃培养箱中发 酵４８ ｈ，每４ ｈ取１次样。每批次实验做３个平行。 １．５．５ 发酵豆粕的预处理 １．５．５．１ 高效液相色谱样品处理 每次取样取４ ｇ发酵豆粕于５０ ｍＬ离心管中，加 入４０ ｍＬ去离子水搅拌混匀静置１ ｈ后取上清，经 ０．２２ ｍ滤膜过滤后置于液相瓶中用于下一步实验。 １．５．５．２ ＳＤＳ—ＰＡＧＥ凝胶电泳样品处理 称取３ ｇ豆粕于１００ ｍＬ烧杯中，加入３０ ｍＬ ０．２％ＮａＯＨ室温下搅拌１５ ｍｉｎ，于６ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心 ７ ｍｉｎ，弃脂层和沉淀小心留取上清液２ ｍＬ，稀释５倍 留样。取３０ Ｌ经稀释的样品上清液，加１０ Ｌ ４× ｂｕｆｆｅｒ，沸水浴１０ ｒａｉｎ，１３ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心５ ｍｉｎ用上 清上样。 １．５．６ 高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）分析样品 使用日立高效液相色谱仪，紫外吸收检测器，分 ４４ ｌ ｚ ！：璺曼 ：！ ｆ！Ｑ！ ！曼曼璺 析柱用有机酸柱（Ａｎｉｎｅｘ Ｈｐｘ－８７Ｈ ｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｏｌ— ｕｍｎ）柱温５０℃，流动相５ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｈ ＳＯ 溶液，流速 ０．６ ｍＬ／ｍｉｎ，进样量１０ Ｌ，标样及样品每个跑２７ ｍｉｎ。输出图谱进行分析。根据出峰时间和峰面积和 标准品比对，计算样品中各种有机酸的含量。 １．５．７ ＳＤＳ—ＰＡＧＥ凝胶电泳 按照试剂盒中的说明书配置：１２％的分离胶，５％ 的浓缩胶。上样量２Ｏ Ｌ，先用８０ Ｖ的电压跑２０ ｍｉｎ 后，继续用１２０ Ｖ的电压跑１２０—１８０ ｒａｉｎ。跑胶结束 后，先用固定液固定０．５ ｈ，再用考马斯亮蓝染色液染 色１ ｈ，最后用脱色液脱色３ ｈ，用凝胶成像仪拍照，进 行图像分析。 ２ 结果与讨论 ２．１植物乳杆菌ＪＵＮ－ＤＹ一６生长曲线 测定ＯＤ 。。后绘制该菌的生长曲线（图１）。该菌 生长２４ ｈ左右进入平台期。实验选用１５～１８ ｈ的菌 液作为种子液为宜。 图１植物乳杆菌ＪＵＮ—ＤＹ一６生长曲线 Ｆｉｇ．１ Ｇｒｏｗｔｈ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｐｌａｎｔ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ＪＵＮ—ＤＹ一６ ２．２发酵豆粕不同有机酸含量分析 以下图中出现的ＡＢＣＤＥＦＧＨ分别代表不同的发 酵工艺：Ａ．未添加蛋白酶且同时加乳酸菌；Ｂ．未添加 蛋白酶且隔夜后添加乳酸菌；Ｃ．０．５％蛋白酶同时接 种乳酸菌；Ｄ．０．５％蛋白酶隔夜接种乳酸菌；Ｅ．１％蛋 白酶同时接种乳酸菌；Ｆ．１％蛋白酶隔夜接种乳酸 菌；Ｇ．２％蛋白酶同时接种乳酸菌；Ｈ．２％蛋白酶隔夜 接种乳酸菌。 ２．２．１ 乳酸含量分析 乳酸（Ｃ Ｈ Ｏ ）能维持动物肠道菌群平衡，减少 腹泻，促进钙质的吸收。从乳酸含量来看（图２），Ｇ． 添加２％蛋白酶同时接种乳酸菌的条件下乳酸含量 最高为７．４３５ ｇ／Ｌ，其次是Ｄ．添加０．５％蛋白酶隔夜 添加乳酸菌、Ｆ．添加１％蛋白酶隔夜添加乳酸菌和 Ｃ．０．５％蛋白酶同时添加乳酸菌的条件，乳酸含量分 别为６．４９５ ｇ／Ｌ、６．４７０ ｇ／Ｌ和６．３８５ ｇ／Ｌ，与对照组Ａ 相比，分别增加了３１．９％、３２．４％、３３．０％。由此可 见，若想提高豆粕中的乳酸含量，可以选择添加２％ 蛋白酶同时接种乳酸菌。 Ａ Ｂ Ｃ 山 Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ 不同发酵工艺 图４发酵显粕丙酸含量 Ｆｉｇ．４ Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ 不同发酵工艺 图２发酵豆粕乳酸含量 Ｆｉｇ．２ Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ２．２．２ 乙酸含量分析 乙酸（Ｃ Ｈ Ｏ ）是很好的抗微生物剂、酸度调节 剂和酸味剂，但是有较为刺激的气味。从乙酸含量来 看（图３），Ｇ．添加２％蛋白酶同时接种乳酸菌的条件 下乙酸含量最高为４．２６１ ｇ／Ｌ，其次分别是ｃ．添加 ０．５％蛋白酶隔夜添加乳酸菌、Ｄ．０．５％蛋白酶同时 添加乳酸菌和Ｅ．添加１％蛋白酶同时添加乳酸菌， 产酸量分别为３．６５０ ｇ／Ｌ、３．５７５ ｇ／Ｌ、３．６８０ ｇ／Ｌ。对 照组（Ａ）乙酸的含量为３．０７ｇ／Ｌ。 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ 不同发酵工艺 图３发酵豆粕乙酸含量 Ｆｉｇ．３ Ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ２．２．３ 丙酸含量分析 丙酸（ｃ，Ｈ Ｏ：）具有很好的防真菌和霉菌的作 用，效果优于苯甲酸，是极佳的食品防腐剂。从丙酸 含量看（图４），Ｄ．添加０．５％蛋白酶隔夜接种乳酸菌 的条件下发酵，丙酸含量最高，为２．８４０ ｇ／Ｌ，而对照 组Ａ丙酸的含量为１．９４５ ｇ／Ｌ。其次是Ｈ．添加２％ 蛋白酶隔夜接种乳酸菌，丙酸含量为２．５２５ ｇ／Ｌ。发 酵豆粕中丙酸的积累，能有效延长发酵豆粕存储的时 间。另外，实验发现糖蜜的添加与否与丙酸的积累存 在紧密联系，不添加糖蜜组基本不积累丙酸。 ２．２．４柠檬酸含量分析 柠檬酸（Ｃ Ｈ Ｏ，）具有抗氧化、增加酸味、抑制细 菌、护色、改进风味、清除有害金属的作用，是良好的 食物酸味剂。由图５分析，从柠檬酸含量看，各种发 酵条件下都明显比对照组产量多，都在１．０００ ｇ／Ｌ 左右。 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ ㈣ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ 不同发酵工艺 图５ 发酵豆粕柠檬酸含量 Ｆｉｇ．５ Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ２．２．５苹果酸含量分析 苹果酸（Ｃ Ｈ Ｏ ）是很好的稳定剂，有较好的抗 氧化能力，在酸性条件下杀菌性很强，能促进氨基酸 的吸收。与柠檬酸相比，酸度更大，产生热量更低，口 味上更柔和。由图６可知，从苹果酸含量来看，ｃ．添 加０．５％蛋白酶同时接种乳酸菌的条件下产量最高 为０．９４０ ｇ／Ｌ，其他条件下苹果酸的产量相差不大。 ２０ ｏｏ ８０ ６ｏ ４０ ２０ ００ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ 不同发酵工艺 图６发酵旦粕苹果酸含量 Ｆｉｇ．６ Ｍａｌｉｅ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ２．２．６琥珀酸含量分析 琥珀酸（Ｃ Ｈ Ｏ ）可以产生酸味、呈味，也可以用 作防腐剂。由图７可知，Ｈ．２％蛋白酶隔夜接种乳酸 菌的条件下琥珀酸含量最高为０．６９５ ｇ／Ｌ，其他条件 生蔓 鲞墓 Ｑ塑（星塞 塑２ Ｉ４５ 一 ． ／■弱国鎏謦冒翟Ｉ！ ！ ！ ！ ｌ 下琥珀酸含量明显比对照组Ａ产琥珀酸量高，且差 别不大。 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ 不同发酵工艺 图７发酵豆粕琥珀酸含量 Ｆｉｇ．７ Ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ２．２．７总酸含量分析 发酵豆粕中，各种有机酸的含量和总酸的量决定 了发酵豆粕的品质。添加糖蜜的发酵豆粕，由图８可 以看出，Ｃ．０．５％蛋白酶同时接种乳酸菌、Ｄ．０．５％蛋 白酶隔夜接种乳酸菌和Ｇ．２％蛋白酶同时接种乳酸 菌这３种条件下总酸量相对较高，分别为１４．６４６、 １４．８１８和１４．８５４ ｇ／Ｌ。综合各种有机酸的情况，且 考虑生产成本，不难看出，条件Ｇ．２％蛋白酶同时接 种乳酸菌的情况下乳酸、乙酸含量最高；Ｃ．０．５％蛋 娇 ● 隧 白酶，同时接种乳酸菌的条件产苹果酸最多，● 蜜蜜 ｉ Ｉ Ｄ．０．５％蛋白酶，隔夜接种乳酸菌的条件下产丙酸最 一—ｋ 多，其他有机酸的含量在３种条件下大体相当。若要 一ｌ 默 使发酵豆粕保存时间长，则选择Ｄ．０．５％蛋白酶隔夜 五．｜； 接种乳酸菌的条件；若要发酵豆粕中乳酸乙酸含量最 一ＩＩ高、总酸含量最高，要选择Ｇ．２％蛋白酶同时接种乳 酝 王— 酸菌的条件；若要提高发酵豆粕的风味和适口性，需 ．．１要选择Ｃ．０．５％蛋白酶同时接种乳酸菌的条件来制 骶 备发酵豆粕。 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ 不同发酵工艺 图８加糖蜜组总酸情况 Ｆｉｇ．８ Ｔｏｔａｌ ａｃｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ａｄｄ ｍｏｌａｓｓｅｓ ｇｒｏｕｐ ２．３ 糖蜜对发酵豆粕有机酸含量影响分析 由图９分析得出，各条件下，未加糖蜜组的总酸 量在３．５９４～１０．４６３ ｇ／Ｌ。而加入糖蜜组有机酸总量 在８．８１９～１４．８１８ ｇ／Ｌ，可见不同的发酵工艺下添加 ４６｛ ｚ ： 曼 ： （！ ！ ！曼曼璺２ 糖蜜后总酸产量提高４．３５５～５．２２５ ｇ／Ｌ。由图１０、 图１１在不同的发酵条件下，未加糖蜜组和加糖蜜组 发酵豆粕产各种有机酸含量对比可见，糖蜜对于乳酸 菌发酵豆粕产乙酸、柠檬酸、苹果酸等影响较大。同 时未加糖蜜组不产乳酸、丙酸，加入糖蜜组产生的乳 酸、丙酸量则较高。由此可见糖蜜对于乳酸菌发酵豆 粕产有机酸的种类、有机酸的总含量均有重要的 影响。 。 ｓ 慧 （） Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ 不同发酵工艺 图９加糖蜜组及未加糖蜜组总酸含量比较 Ｆｉｇ．９ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｍｏｌａｓｓｅｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ 琥珀酸 ， ● 血ｌ 如 踊 ０ 不同发酵工艺 图１Ｏ添加糖蜜组有机酸含量 Ｆｉｇ．１０ Ｖａｒｉｏｕｓ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ａｄｄ ｍｏｌａｓｓｅｓ ｇｒｏｕｐ ３．０ ２．０ ｉ 蘧 ｎｉ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ 不同发酵工艺 １ １ 未添加糖蛋组有机酸含量 Ｆｉｇ．１ １ Ｖａｒｉｏｕｓ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ２．４ ＳＤＳ—ＰＡＧＥ凝胶电泳分析 大豆球蛋白是豆粕的主要营养成分之一，其中伴 ７ｓ大豆球蛋白及１ｌｓ大豆球蛋白是大豆球蛋白最重 要的成分¨ 。其中，７ｓ伴大豆球蛋白由３个亚基组 成，其相对分子质量分别为６０ ４６６ Ｄａ，５５ ０２９ Ｄａ， ４９ ０４３ Ｄａ，１１Ｓ大豆球蛋白也由３个亚基组成，其相 对分子质量分别为４４ ６３４ Ｄａ，３９ ７７９ Ｄａ和１７ ９５２ Ｄａ。根据ＳＤＳ．ＰＡＧＥ凝胶电泳结果图１２可知，利用 乳酸菌，在少量酶的作用下能够完全降解伴７ｓ和 １１Ｓ大豆蛋白，而且效果非常明显。 ｋＤａ Ｍａｒｋｅｒ豆粕０％０．５％１％２％ ９７．４ ６６．２ ４３ ３ｌ ２２ 图１２发酵豆粕中大豆蛋白的降解情况 Ｆｉｇ．１ ２ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ３ 结论 发酵豆粕中的酸谱根据发酵工艺的不同有较大 的差别，主要含有３种有机酸：乳酸、乙酸和柠檬酸。 在添加了糖蜜的情况下，发酵豆粕中可积累较大量的 丙酸，且植物乳杆菌的生长情况明显较未添加糖蜜组 好，未加糖蜜组的总酸量在３．５９４～１０．４６３ ｇ／Ｌ。而 加入糖蜜组有机酸总量在８．８１９～１４．８１８ ｇ／Ｌ，明显 较未加糖蜜组高。碱性蛋白酶添加量０．５％，糖蜜添 加量为３％的条件下发酵豆粕，产生有机酸含量峰值 为１４．６４６ ｇ／Ｌ，比不添加碱性蛋白酶仅使用乳酸菌发 酵的情况下提高了２３．１％。实际生产中应根据具体 目的调整发酵工艺以满足生产要求。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝 胶电泳结果显示，发酵豆粕中的大豆蛋白降解为小分 子多肽。 参 考 文 献 ［１］ ＳＡＸＥＬＩＮ Ｍ，ＴＹＮＫＫＹＮＥＮ Ｓ，ＭＡＴＴＩＬＡ—ＳＡＮＤＨＯＬＭ Ｔ， ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍｉｃｒｏｂｅｓ：ｆｒｏｎ ｍａｒｋｅｔｓ ｔｏ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２００５，１６（２）：２０４—２１１． ［２］ ＦＲＩＡＳ Ｊ，ＳＯＮＧ Ｙ Ｓ，ＭＡＲＴＩＮＥＺ—ＶｌＬＬＡＬＵＥＮＧＡ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ＆Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，５６（１）：９９—１０５． ［３］ＲＥＦＳＴＩＥ Ｓ，ＳＡＨＬＳＴＲＯＭ Ｓ，ＢＲＡＴＨＥＮ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｌｉｍｉｎａｔｅｓ ｉｎｄｉｇｅｓｔｉｂｌｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ｆｏｒ Ａｔｌａｎｔｉｃ ｓａｌｍｏｎ （Ｓａｌｍｏｓａｌａｒ）［Ｊ］．Ａｑｕａｅｕｈｕｒｅ，２００５，２４６（１—４）：３３１— ３４５． ［４］ 熊本海．有机酸在断奶仔猪１３粮中的作用机理分析 ［Ｊ］．饲料研究，２００１（１１）：１９—２０． ［５］ ＦＥＮＧ Ｊ，ＬＩＵ Ｘ，ＸＵ Ｚ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ｏｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉ— ｔｉｅｓ ｉｎ ｗｅａｎｅｄ ｐｉｇｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｓｃｉ— ｅｎｃｅｓ，２００７，５２（８）：１ ８４５—１ ８５０． ［６］ＬＩＵ Ｘ ＦＥＮＧ Ｊ，ＸＵ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙ— ｂｅａｎ ｍｅａｌ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ— ｔｉｃｓ ｉｎ ｗｅａｎｅｄ ｐｉｇｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｔｕｒｋｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ＆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００７，３１（５）：３４１—３４５． ［７］ＨＩＬＬ Ｇ Ｍ，ＣＲＯＭＷＥＬＬ Ｇ Ｌ，ＣＲＥＮＳＨＡＷ Ｔ Ｄ，ｅｔ ａ１． Ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍａ ｃｈａｎｇｅｓ ｆｒｏｍ ｆｅｅｄｉｎｇ ｈｉｇｈ ｄｉｅｔａｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｚｉｎｃ ａｎｄ ｃｏｐｐｅｒ ｔｏ ｗｅａｎｌｉｎｇ ｐｉｇｓ（ｒｅｇｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０００，７８（４）：１ ０１０—１ ０１６． ［８］ＰＬＵＳＫＥ Ｊ Ｒ，ＨＡＭＰＳＯＮ Ｄ Ｊ，ＷＩＬＬＩＡＭＳ Ｉ Ｈ．Ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｗｅａｎｅｄ ｐｉｇ：ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｃｉ— ｅｎｃｅ，１９９７，５１（１—３）：２１５—２３６． ［９］ ＣＨＩＱＵＩＥＲＩ Ｊ，ＳＯＡＲＥＳ Ｒ Ｔ Ｒ Ｎ，ＬＹＲＡ Ｍ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｏｒ— ｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｅｅｄ ｏｆ ｗｅａｎｅｄ ｐｉｇｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈｉｖｏｓ Ｄｅ Ｚｏｏｔｅｃｎｉａ，２００９：６０９—６１２． ［１０］ ＮＧ Ｗ Ｋ，ＫＯＨ Ｃ Ｂ，ＴＥＯＨ Ｃ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｆａｒｍ—ｒａｉｓｅｄ ｔｉ－ ｇｅｒ ｓｈｒｉｍｐ，Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ，ｆｅｄ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｆｅｅｄｓ ｗｉｔｈ ａｄｄｅｄ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｓｈｏｗｅｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ， ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｖｉｂｒｉｏ ｈａｒｖｅｙｉ，ｃｈａｌ— ｌｅｎｇｅ［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２０１５，４４９：６９—７７． ［１１］ ＷＩＴＨＬＥＲ Ｒ Ｅ，ＢＥＡＣＨＡＭ Ｔ Ｄ，ＳＯＬＡＲ ＩＩ，ｅｔ ａ１． Ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ ｇｒｏｗｔｈ，ｓｍｏｈｉｎｇ，ａｎｄ ｍａＨｎｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｄｉｐｌｏｉｄ ａｎｄ ｔｒｉｐｌｏｉｄ ｃｏｈｏ ｓａｌｍｏｎ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎ— ｃｈｕｓｋｉｓｕｔｃｈ）［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，１９９５，１３６（１）：９１— １Ｏ７． ［１２］ ＡＴＫＩＮＳＯＮ Ｄ，ＨＡＵＳＥＲ Ｈ，ＯＬＤＡＮＩ Ｄ．Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｙ ｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｌｙｃｉｎｉｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ Ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１９７５，４１２ （４１２）：２１４—２２８． 生苤 鲞蔓 Ｑ塑（星蔓 塑塑２ Ｊ４７ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ｂｙ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｌ ｃｆＤ 口 ｆ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＭＡＯ Ｙｉｎ，ＺＯＵ Ｚｏｎｇ—ｓｈｅｎｇ，ＤＥＮＧ Ｙｕ ｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｍ ｉｎｇ ＬａｂｏｒａｔｏｆＹ ｆｏ ｒ’Ｃｅｒｅａｌ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ＿ｒ∽ｈｎｏｌｏｇｙ．Ｊｉａｎｇｎａｎ Ｕｎｉｗ ｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ ＪＮＵ—ＤＹ．６ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒ（，ｍ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ．Ｉｔ ｈａｄ ｇｒｅａｔ ｐｏ— ｔｅｎｔｉａｌ ｉｎ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔ ｇｒｅｗ ｒａｐｉｄｌｙ．ｗｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ６ ｋｉｎｄｓ ｏｆ’ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ，ｍａｉｎｌｙ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ，ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ，ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄａｎｄｅｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ．Ａｎｄ ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｌａｓｓｅｓ ｈａｄ ｇｒｅａｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ（・‘）ｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｙｉｅｌｄ ｏｆｐｒｏｐｉｏｎｉｅ ａｅｉｄｉｎ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａ１．ｗｅ ｗｏｒｋｅｄ ｏｕｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｍＴ１ ｍａｓｓ ｒａｔｉｏ ｆｏｒ ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ（１００ｇ）：Ａｌｃａｌａｓｅ ０．５％，ｍｏｌａｓｓｅｓ ３％，ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｏｒｇａｎｉｅ ａｃｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｒｅａｃｈｅｄ １４．６４３ ｇ／１ ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ １．２３１ ｆｏｈｔ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｅｏｎｔｒｏ Ｉｇｒｏｕｐ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｂｙ ＳＤＳ—ＰＡＧＥ ｗｅ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒａｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｅｐｔｉｄｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ；ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｅ（￣ｈｎｉｑｕｅｓ；ｏｒｇａｎｉ（ ａｃｉｄｓ ●◆●● 敏 Ｈ 卜波 求疗…迁 川二三、流 万巾巾 、新披会述爪． ．１、、题披场讣 孵技 长、伐外 、公 欢迎订阅《粮食与食品工业》 ｉｊ驯川 交教 阵收求 刊 槲ｔＩ，田数 化ｊｃＩｊ｝ｉＪ甜收求 川 心 川（逑选）敏 睬收求 Ｉ：Ｉｊ 披期『ｌＪ数掘眸收？ 期刊 食 ｊ食品ｌ上：、Ｉ｝，》朵忐足袋粮油ｌ＾础 沦、实 体的综合｝：｝坎粥｝ｆＵ．Ｌ二成为水、向、；【ｌｊ、 粉砭 堋ｌ：、仓能、中＝：ｊ＝化验等 业段伽新技 ｌ＾、新城粜 息的 好戏体， 牲技术人 跏磋技艺 介适 台，怂ｌ｛ｌ㈨粮浦学会食 油瓶分金ｆｌｉ 鑫 食分 会刊 波 ０ 楸油上 、食 １＾科技、 物上 、 食流翅 汕建竣工 、粮油装 ｌ功 圳、粮油市 食、 准－Ｊ扮测、 息传递等 ｝ｊ …肉 蚁朋ｌ５ ｎ｝ｌｊ版，人ｌ６Ｋ缸 ’、，订阅方法： ●邮发代 ：２８．１９７．个 邮ｊ。０（ ）均日１ｈ丁闻 瓤坶ｊ 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