微生物基础实训习题

一．填空题

1．显微镜的光学系统由__ , , 和__ ___ 组成。

2．显微镜的机械部分包括_ ， ， ， ， ， , , ， 等九部分组成。

3 使用显微镜低倍镜观察时, 聚光器应该_ ，使用显微镜高倍镜观察时，聚光器应

该 。

4．高倍镜头的数值孔径通常为__ ___，放大倍数为___ ____。 5．油镜头的数值孔径通常为_____ __，放大倍数为___ __。 6．低倍镜头的数值孔径通常是__ ___，放大倍数为____ _ 。

7．用日光灯作光源时，通常用__ ___反光镜，用自然光作光源时， 通 常用__ __ 反光镜。

8．细菌经简单染色后呈__ ___。

9．简单染色的操作程是__ __,__ __, __ _, _ __, __ _, __ __。

10．革兰氏染色的操作程序是 ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， 。 11．细菌经革兰氏染色后，革兰氏正反应菌呈_______，革兰氏负反应菌呈________。 12．革兰氏染色的关键操作是__ __。

13．细菌在革兰氏染色过程中，最后用蕃红复染的原因是__ 、 、 ， ， ， 。 14．两个典型的革兰氏正反应细菌和革兰氏负反应细菌经革兰氏染色后都呈阴性反应往往是由于_ 和__ _引起。

15．有荚膜的细菌用负染色法染色后, 荚膜为____ 色，菌体为_____ 色。

16．芽胞染色的操作程序是___ ， ， ， ， ， ， ， 。 17．用孔雀绿和复红作细菌芽胞染色时，可使菌体呈____ 色，使芽胞呈____ 色。 18．芽胞染色的关键操作是__ ___。

19．霉菌水浸片的制片程序是_ ， ， ， ， ， 。 20．制霉菌水浸片时加棉兰染色液可使菌体呈___ 色。

21．实验室配制固体培养基的操作程序是 ， ， ， ， ， ， 。 22．配制常规培养基时通常用______水。

23．配制培养基时常用__ ___ 和 ______调节 pH值。

24．固体培养基常用______ 作凝固剂，普通固体培养基的用量一般为___ __ ，半固体培

养基的用量一般为_________。

25． 生物在培养基中生长时，由于其_ 而使培养基_ 发生改变； 所以在配

制培养基时，为维持该条件的相对恒定， 常在培养基中加入缓冲物质如__ _或_ 。

26．高氏培养基通常用来培养_____ ，其pH值为__________。

27．PA培养基通常用来培养______，其pH值为___________。

28．牛肉膏蛋白胨培养基通常用来培养_ _ 菌，其pH值为________。 29．半固体培养基通常用来检查___ ____。

30．摆试管斜面的基本操作方法是， ， ， 。 31．干热灭菌通常用来灭菌__ __，培养基的灭菌通常用 _ ___。 32．干热灭菌的工艺条件是__________。 33．使用手提式灭菌锅进行灭菌的操作程序

是 ， ， ， ， ， ， ， ， ， 。 34． 不能加热灭菌的液体培养基应采用__ __ 除菌，通常用的器皿有______和_____ 。 35． 无菌室杀菌通常采用__ __ 和__ __相结合的方法。

36． 穿刺接种使用的接种工具为__ ___，斜面接种使用的接种工具为___ ___。 37． 细菌稀释测数通常采用__ __ 稀释法，稀释用试管无菌水为 ______ 毫升。 38． 进行稀释测数使用的主要器材有_________、______________、___________、

_________。

39． 显微计数的操作程序是_____________________、 __________________、

_________________________、 _____ _____________、 _____________________、_____________________、 _____________________、 __________________________。 40． 进行酵母菌的显微计数使用的主要工具是____________ 和_______________。 41． 进行细菌的显微计数时使用的主要工具是___________和_____________。

42． 测微生物大小使用的主要工具是_____________、_____________和________ __。 43． 普通光学显微镜测酵母菌的大小的操作程序是_________________, _______________,

_______________, _______________, _______________, _________________, ________________, __________________, ____________________。

44． 摇床振荡培养通常用来培养___________ 微生物，享格特的厌氧操作方法通常用来培

养______________菌。

45． 从土壤中分离真菌时, 通常在培养基中加入________和__________ 抑制细菌的生长。 46． 由于各种微生物对某种化合物如抗生素、染料的敏感性不同， 可以利用这一特征来从

土壤中分离出不同类群的微生物。 如在培养基中加入_________ ，会杀死或抑制____________ 的生长而分离出___________； 在培养基中加入__________ ，有利于分离到革兰氏阴性菌。

47．检查乳品和饮料是否含有__________ 等肠道细菌，可采用 _______________ 培养基，在这种培养基平板上____________ 会形成具有__________光泽的紫黑色小菌落。

二．选择题：

1．牛肉膏蛋白胨培养基适用于 。 A．真菌

B、放线菌 C、细菌

D、蓝细菌

2．高氏1号培养基用来培养： 。

A. 细菌 B. 真菌 C. 放线菌

3．实验室中最常用的真菌固体培养基是 。 A．马铃薯培养基

B、高氏一号培养基

C、马铃薯蔗糖培养基

D、牛肉膏蛋白胨培养基

4．配制固体培养基时，琼脂的常用浓度为： 。

A．0.2%左右 B、0.5%左右 C、1.5-2.0% D、15-20%

5．配制半固体培养基时，琼脂的常用浓度为： 。

A．0.2%左右 B、0.5%左右 C、1.5-2.0% D、15-20%

6． 半固体培养基的琼脂加入量通常是: 。

A. 1% B. 0.5% C. 0.1% D．1.5-2.0%

7． 半固体培养基的主要用途是: 。

A. 检查细菌的运动性 B. 检查细菌的好氧性 C. A.B. 两项

8．培养基配制好后分装入试管，液体培养基的分装量以试管高度的： 为宜。 A．1/2

B．1/3 C、1/4 D、1/5

9．固体培养基的分装量不超过试管高度的 。 A．1/2

B．1/3 C、1/4

D、1/5

10．固体培养基分装三角量以不超过三角烧瓶容积的 为宜。

A．1/2 B．1/3 C、1/4 D、1/5

11．半固体培养基的分装量以试管高度的 为宜。

A．1/2 B．1/3 C、1/4 D、1/5

12．盛放培养基的试管应该塞棉花是因为起 作用

A 过滤 B 密封 C 防潮 D 阻氧

13．培养基中使用酵母膏主要为微生物提供： 。

A．生长因素 B．C源 C. N源

14．用牛肉膏作培养基能为微生物提供： 。

A. C 源 B. N 源

C. 生长因素

D. A,B,C 都提供

15．制备培养基中常用的碳源物质是： 。

A，糖类物质 B．碳酸盐 C．农副产品

16．高温干燥灭菌的温度应控制在 。 A．120ºC，1h

B、140ºC，2h C、150～170ºC，1～2h D、200ºC，3h

17．干热灭菌的关键操作是: 。

A. 灭菌物不能有水 B. 保温过程中不能开箱门 C. 降温不能太快

18．一般试验室用培养皿灭菌，常采用 。 A．灭菌，150～170 ºC，1-2 h

B、湿热高压蒸汽灭菌121 ºC，3 h

C．间歇灭菌，2次，100 ºC，每次1 h

D、巴斯德灭菌60 ºC，1 h

19．在寻常烤箱中，在１６０℃达到灭菌效果所需时间为 。

Ａ ５分钟 Ｂ ３０分钟 Ｃ ５０分钟 Ｄ ９０分钟

20．实验室培养基高压蒸汽灭菌的工艺条件是: 。

A. 121℃/30min B. 115℃/30min C. 130℃/30min

21．使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是: 。

A. 排冷气彻底 B. 保温时间适当 C. 灭菌完后排气不能太快 D. A-C

22．常规加压灭菌的致死温度为 。 A．100ºC，半小时

B、110ºC，半小时 C、121ºC，半小时 D、105ºC，半小时

23．高压灭菌锅杀死微生物需要下列所有条件，除 之外。

Ａ 蒸汽温度１２１℃ Ｂ 每平方英寸１５英镑压力 Ｃ １０个大气压的体积 Ｄ １５分钟

24．一种含有葡萄糖的液体培养基，需采用： 灭菌 A．15磅/英寸²加压蒸汽灭菌 B、10磅/英寸²加压蒸汽灭菌 C、煮沸消毒

25．巴氏消毒的工艺条件是: 。

A. 62-63℃/30min B. 71-72℃/15min C. A.B. 均可

26．牛奶常用的消毒法为 。

Ａ 巴斯德消毒法 Ｂ 煮沸消毒法 Ｃ 间歇灭菌法 Ｄ 加压蒸汽灭菌法

27．任何降低环境中微生物数量的物质是 。

Ａ 消毒剂 Ｂ 防腐剂 Ｃ 媒介 Ｄ 氧化剂

28．乙醇是常用的消毒剂。其杀菌效果最好的浓度为： 。

A．50% B、70% C、95% D、100%

29．间歇灭菌过程需要下列所有条件，除了 之外。

Ａ 蒸汽温度１００℃ Ｂ 每平方英寸１０英镑压力 Ｃ ３０分钟时间 Ｄ 连续三天的处理

30，无菌室空气灭菌常用方法是: 。

A. 甲醛熏蒸 B. 紫外灯照射 C. 喷石炭酸 D. A.B. 并用

31．紫外线能杀菌。其中以波长为 的杀菌力最强。 A．200nm

B、300nm C、265nm—266nm D、300nm以上

32．下列方法中测定样品中微生物活菌数量的方法是 。 A．平板菌落计数法

B、比浊法 C、测含氮量法 D、称干重法

33．平板划线分离法需要下面所有的物品，除了 之外。

Ａ 接种环 Ｂ 琼脂培养基平板 Ｃ 细菌的培养物

Ｄ 电泳仪

34．细菌平板接种制备好后，放入恒温箱培养，需 。 A．正放

B、斜放 C、倒置 D、随意

35．深层穿刺接种细菌到试管固体培养基中能 。

Ａ 提供厌氧菌生长条件 Ｂ 除去代谢废物的一个机会 Ｃ 增加钾和钠离子的数目 Ｄ 增加氧气

36．除 外，下列方法都是厌氧菌培养法。

Ａ 高层琼脂柱 Ｂ 亨盖特滚管技术 Ｃ 堆积培养 Ｄ 曲法培养 A. 复红 B. 蕃红 C. 结晶紫 D. 孔雀绿 E. A-D 均 可

38．革兰氏染色是对 的染色。 A．细胞壁

B、细胞质 C、细胞膜 D、细胞核

39．革兰氏染色法乙醇脱色后革兰氏阴性细菌呈 。 A．蓝紫色

B、红色 C、无色 D、深绿色

40．革兰氏染色的关键操作步骤是 。 A．结晶紫染色

B、碘液固定 C、酒精脱色 D、复染

41．用来染芽孢的染料通常是 。

37．进行简单染色使用的染色液通常是: 。

A．孔雀绿

B、结晶紫 C、复红 D、番红 A. 菌丝要分散

B. 菌丝首先要用50%的乙醇浸润 C. 盖盖玻片不能有气泡 D. A-C

43．下列 是显微镜的高倍镜。

A 15× B 45× C 90× D 100×

44．微生物镜检时要 。

A 先低倍镜后高倍镜 B 直接高倍镜 C 直接用油镜 D 先高倍镜后低倍镜

45．在使用显微镜油镜时为了提高分辨力，通常在镜头和盖玻片之间滴加: 。

A. 二甲苯 B. 水 C. 香柏油

46．在高倍镜调至最清晰后，下列油镜操作顺序正确的是： 。

1．将镜筒提升 2、转换油镜镜头 3、滴加香柏油 4．下降镜筒 A．（1）、（2）、（3）、（4） B．（2）、（1）、（3）、（4）

C．（3）、（2）、（1）、（4） D（3）、（1）、（2）、（4）

47．显微镜使用过后，用擦镜纸擦过香柏油，要用有机熔剂擦掉油镜上残存的香柏油，使用的是

。 A．乙醚

B、酒精 C、丙酮 D、二甲苯

三．判别题：

42．霉菌水浸制片的关键操作是： 。

1．显微镜镜头的放大倍数越大，它的数值孔径值越大，其镜口角也越大。( )。 2．数值孔径愈大，显微镜的分辩率愈高（ ）

3．使用高倍镜和油镜时，进入物镜的光线要尽可能明亮些（ ） 4．用油镜镜检时应将聚光器升至最高。( )。 5．使用高倍镜时, 可将聚光器升至最高。( )。 6．使用油镜的正确操作步骤是: ( )。

1. 低倍镜观察。 2. 高倍镜观察。

3. 转出高倍镜头， 滴加香柏油后用油镜观察。

7．为了节省时间，可直接在染色涂片上滴加香柏油后, 直接用油镜观察。( )。 8．在擦拭显微镜镜头时，应向一个方向擦拭。( )。 9．在使用完油镜后，镜头上的油要用擦镜纸擦干净（ ） 10．浸油的油镜头可用软的卫生纸擦净。()。

11．制作细菌涂片时，菌种要多些，以免个体太小不好寻找（ ） 12．制成涂片后，就可以在火焰上迅速通过1—2次来固定涂片（ ） 13．细菌染色中的水洗要从玻片上端细细流下，避免直接冲在涂片上（ ） 14．涂片水洗至无色后，便可以置于油镜下观察（ ）

15．革兰氏染色的关键一步是脱色。如脱色时间过长，会造成革兰染色反应的假阳性( ) 16．在革兰氏染色中，被染成红色的细菌称革兰氏阳性菌，染成紫色的细菌称革兰氏阴性菌

( )

17．革兰氏染色法是细胞质染色， 而不是细胞壁染色。( )

18．E. coli 经革兰氏染色后，菌体呈红色，它是革兰氏正反应细菌。()。 19．芽孢染色中：

（1）染色过程须用微火加热，自染料开始冒蒸汽时算起约4—5分钟（ ） （2）在加热过程中切勿使染料蒸干,必要时可添加少许染料（ ） （3）加热完毕后,要马上用自来水冲洗至孔雀绿不再裉色为止（ ） 20．观察根霉，青霉只需用低倍镜观察即可。( ) 21．在光学显微镜下，根霉的孢子囊是透明的。( )。 22．所有细菌菌落的表面都是光滑湿润状。( ) 23．所有真菌菌落的表面干燥，呈绒毛状。( )。 24．所有放线菌菌落表面干燥，呈粉粒状。( )

25．实验室做固体培养基时，常加1.8%的琼脂作凝固剂，做半固体培养基时, 琼脂加入量

通常是 0.5%。 :( )。

26．实验室做固体培养基，常加 2% 的琼脂作凝固剂，做半固体培养基时，琼脂加入量通常是1%。( )。

27．为了满足微生物对微量元素的需要，配制培养基所用的水最好使用自来水。( )。 28．用分装器将培养基分装试管时，应谨防培养基沾染试管口。( )。 29．琼脂的熔化温度是80℃以上，凝固温度是45℃以下。( )。

30．琼脂的熔化温度是95℃以上，凝固温度是45℃以下。( )。 31．棉花塞塞入试管的长度应为棉塞全长的 2/3。( )。 32．棉花塞入试管的长度应为棉塞全长的 1/2。( )。 33．摆斜面的长度应不超过试管长度的 2/3。( )。 34．摆斜面的长度应不超过试管长度的1/2。( )。

35．配制固体培养基时，一旦分装好后要趁热将试管摆斜，使培养基凝成斜面。( ) 36．培养基配制好后就可以马上用于接种。( )

37．用于固化培养基时琼脂较之明胶具有更多的优点（ ）

38．火焰灼烧法灭菌彻底、迅速简便且应用广泛，适于各种物体的灭菌（ ） 39．干热灭菌法相对湿热灭菌法的优点是可保持物品干燥（ ）

40．玻璃器材洗净后在急需时可采用高压蒸汽灭菌，而不能用干热灭菌。( )。 41．加压蒸汽灭菌时，时间从压力开始升高时算起约20 min（ ）

42．使用手提灭菌锅灭菌后，为了尽快排除锅内蒸汽，可直接打开排气阀排气。( )。 43．酒精浓度愈高，杀菌力愈强( )

44．波长为265nm—266nm的紫外线杀菌力最强。因此可以用于培养基的灭菌( ) 45．巴斯德消毒法不能杀死细菌的芽孢。（ ） 46．可采用高压蒸汽灭菌对抗体进行灭菌。（ ） 47．对热敏感的溶液可采用巴斯德消毒法来灭菌。（ ） 48．无菌吸管上端塞入棉花是为了过滤口中的有菌空气。:( )。 49．无菌吸管上端塞入棉花的目的是为了防止菌液吸入口中。( )。 50．稀释平板测数通常是采用十倍稀释法。( )。 51．稀释平板测数通常采用的是二倍稀释法。( )。

52．做稀释平板测数时，只需一支吸管从头稀释到尾即可。( )。 53．做稀释平板测数时，每做一个稀释度都必须更换一支无菌吸管。( )。

54．稀释平板测数时，放线菌计数的标准是选择每皿中菌落数在30-300个之间的稀释度进

行计数。( )。

55．稀释平板测数时细菌计数的标准是选择每皿中菌落数在30-300 个之间的稀释度进行计

数。( )。

56． 稀释平板测数时， 细菌、放线菌，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在30-300 个

的稀释度进行计数。( )。

57．稀释平板测数时，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10-100 个的稀释度进行计数。( )。

58．稀释平板测数时，细菌、放线菌、真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10-100个的稀释度进行计数。( )。

59．用混菌法测微生物活菌数时，每个平皿中的菌液加入量是1ml。:( )。 60．用涂抹法测微生物活菌数时，每个平皿中的菌液加入量是0.1ml。（ ）。

61．稀释平板测数时，无论是用混菌法，还是用涂抹法,每个平皿中的菌液加入量都是 1ml。( )。

62．稀释测数用的无菌水通常是由自来水灭菌而成。( )。

63．显微镜下对细菌细胞计数的数量结果要低于平板技术获得的结果（ ） ．实验室通常使用血球计数板测微生物的总菌数。( )。 65．血球计数板两边的平台比计数区高 0.1cm。( )。 66．血球计数板两边的平台比计数区高 0.1mm。( )。 67．血球计数板计数区的面积是 1 mm。 ( )。

68．用血球计数板计数时，任数5个大方格(80个小格)的菌数即可。:( )。 69．在使用细菌计数板计数时，为了防止计数偏大，计数区四周压线的菌只能数两边。( )。

70．血球]计数板计数区每小格的体积是1/4000mm 。（ 〕。

71．血球计数板计数区共有400个小格，每小格的面积是 1/400 cm。( ) 72．镜台测微尺每小格的实际长度是10微米。( )。 73．目镜测微尺每小格的实际长度是10μm。( )。 74．镜台测微尺每小格的实际长度是10nm( 纳 米)。( )。

75．目镜测微尺每格的实际长度是未知的，需用长度已知的镜台测微尺校正。( )。 76．测微生物的细胞大小时, 需要校正的是镜台测微尺每格的实际长度。:( )。 77．测微生物细胞大小时，需要校正的是目镜测微尺每格的实际长度。( )。

四、名词解释 数值孔径

分辨力 无菌操作 超净工作台 纯培养技术 培养基 合成培养基 天

然培养基 半合成培养基 选择培养基 加富培养基 鉴别培养基 革兰氏染色法 简单染色法 消毒 灭菌 巴氏消毒 干热灭菌 间歇灭菌 过滤除菌 湿热灭菌 稀释平板计数法 显微直接计数法 平板划线分离法

五、问答题

1．试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法。 2．试述划线分离的操作方法。 3．如何检查细菌的运动性? 4．简述配制培养基的基本原则:

5．试述配制培养基的基本过程及应该注意的问题。 6．试述显微计数的基本方法。

7．革兰氏染色反应的成败关键是什么?为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义? 8．如何从土壤中分离得到一个微生物的纯培养体?

9．察氏培养基的组成为:蔗糖:30克,磷酸氢二钾:1.0克,钠:2克, 硫酸镁0.5克, 氯化钾:0.5克,硫酸亚铁: 0.01克,蒸馏水: 1000 ml.试述: 1.该培养基的C源, N源各是什么物质。 2 .除C源和N源外的其它物质起什么作用: 3.该培养基为什么不加生长因子?

2

3

2

参

一．填空题

1．显微镜的光学系统由__反光镜 , 聚光镜 , 物镜 和__目镜___ 组成。

2．显微镜的机械部分包括_镜座， 镜臂， 载物台， 转换器， 镜筒， 推动器, 粗动螺旋 ,微动螺旋， 聚光镜升降螺旋 等九部分组成。

4 使用显微镜低倍镜观察时, 聚光器应该_降低，使用显微镜高倍镜观察时，聚光器应该

适当升高。

4．高倍镜头的数值孔径通常为__0.65___，放大倍数为___40x____。 5．油镜头的数值孔径通常为_____1.25__，放大倍数为___100x 或90x__。 6．低倍镜头的数值孔径通常是__0.25___，放大倍数为____10x 或 8x _。

7．用日光灯作光源时，通常用__平面___反光镜，用自然光作光源时， 通 常用__凹面__ 反光镜。

8．细菌经简单染色后呈__所染染料的颜色___。

9．简单染色的操作程是__涂片__,__干燥__, __固定_, _复红染色1-2分钟__, __水洗_, __晾干__。

10．革兰氏染色的操作程序是涂片， 干燥 ， 固定，结晶紫染色1分钟， 水洗, 碘液媒染1分钟， 水洗， 95% 的乙醇脱色25秒， 水洗 ， 蕃红复染3-5分钟， 水洗， 晾干。

11．细菌经革兰氏染色后，革兰氏正反应菌呈__紫色_____，革兰氏负反应菌呈____红色____。 12．革兰氏染色的关键操作是__酒精脱色__。

13．细菌在革兰氏染色过程中, 最后用蕃红复染的原因是__ G细菌经结晶紫染色、碘液媒染、酒精脱色后，菌体紫色脱去，故需用蕃红复染，这样在光镜下才能见到红色的菌体。 14．两个典型的革兰氏正反应细菌和革兰氏负反应细菌经革兰氏染色后都呈阴性反应往往是

-

由于__酒精脱色时间过长_和__菌体培养时间太长_引起。

15．有荚膜的细菌用负染色法染色后, 荚膜为__无__ 色，菌体为__红___ 色。

16．芽胞染色的操作程序是___涂片， 干燥， 固定， 孔雀绿加热染 色15分钟，水洗， 复红染色 2-3分钟， 水洗， 晾干。

17．用孔雀绿和复红作细菌芽胞染色时，可使菌体呈_红___ 色，使芽胞呈__绿__ 色。 18．芽胞染色的关键操作是__孔雀绿加热染色适当___。

19．霉菌水浸片的制片程序是_加一滴水于载玻片，用解剖针挑取菌丝少许,将菌丝用50%的酒精浸润，将菌丝用蒸馏水水洗，将菌丝放入载玻片水滴中并小心分散，盖上盖玻片。

20．制霉菌水浸片时加棉兰染色液可使菌体呈___浅蓝色。

21．实验室配制固体培养基的操作程序是照配方称取药品，将药品溶解在一定量的 水中后加热煮沸， 将琼脂按量称取后用水浸湿， 将浸湿的琼脂加入煮沸的营养液中， 待琼脂全部融化后调节pH 值， 补充损失的水分， 分装培养基入不同的容器中。 22．配制常规培养基时通常用___自来___水。

23．配制培养基时常用__1 mol NaOH___ 和 ___1 mol HCL___调节 pH值。

24．固体培养基常用__琼脂____ 作凝固剂，普通固体培养基的用量一般为___1.5-2.0%__ ，

半固体培养基的用量一般为____0.5%_____。

26． 生物在培养基中生长时，由于其_新陈代谢 而使培养基_pH值 发生改变； 所以在配

制培养基时，为维持该条件的相对恒定， 常在培养基中加入缓冲物质如__碳酸盐(CaCO3)_或_磷酸盐。

26．高氏培养基通常用来培养__放线菌___ ，其pH值为___7.5-8.0_______。 27．PA培养基通常用来培养___真菌___，其pH值为____5-6_______。

28．牛肉膏蛋白胨培养基通常用来培养_细菌_ 菌，其pH值为___6.8-7.2_____。 29．半固体培养基通常用来检查___细菌的运动性____。

30．摆试管斜面的基本操作方法是_将摆斜面用特制木条放在桌面上， 将装有固体培养基的试管趁热放在特制木条上摆成斜面， 斜面长度不得超过试管长度的1/2， 将试管棉塞部分用灭菌报纸盖上， 以防空气中微生物落到棉塞上引起污染。

31．干热灭菌通常用来灭菌__玻璃器材__，培养基的灭菌通常用 _高压蒸汽灭菌___。 32．干热灭菌的工艺条件是___160-170℃ /2h_______。

33．使用手提式灭菌锅进行灭菌的操作程序是锅内加水，灭菌物体装锅，对称上紧密封螺帽将锅密封 ，加热升温， 排尽锅内冷空气，升温至灭菌工艺条件{一般为98kpa}，在工艺条件下保压计时{一般为30分钟} ，到时间后切断热源，降温，出锅。

38． 不能加热灭菌的液体培养基应采用__过滤法__ 除菌，通常用的器皿有__蔡氏细菌过滤

器____和___滤 膜__。

39． 无菌室杀菌通常采用__紫外灯照射__ 和__喷洒化学药剂(如酚) __相结合的方法。 40． 穿刺接种使用的接种工具为__接种针___，斜面接种使用的接种工具为___接种环___。 41． 细菌稀释测数通常采用__10倍__ 稀释法，稀释用试管无菌水为 ___9___ 毫升。 42． 进行稀释测数使用的主要器材有__酒精灯， 1ml 无菌吸管， 9ml试管装无菌水，

9cm 的无菌平皿。

43． 显微计数的操作程序是__将待测菌进行适当的稀释， 将计数板置于载物台上 , 在低

倍镜下找到计数区, 将菌液加到计数区上, 调焦看到菌体按五点取样法计数五个大方格的菌数, 计算每小格的含菌数，计算出单位体积( 如每 ml)中的含菌数。 44． 进行酵母菌的显微计数使用的主要工具是__显微镜__ 和_血球计数板_。 45． 进行细菌的显微计数时使用的主要工具是__显微镜__和__细菌计数板_。 46． 测微生物大小使用的主要工具是__显微镜， 镜台测微尺 和_目镜测微尺__。 47． 普通光学显微镜测酵母菌的大小的操作程序是__将 镜 台 测 微 尺 置 载 物 台

上，调 焦 找 到 台 尺，在 低 倍 镜 下 校 正 目 镜 测 微 尺 每 格 的 长，在高倍镜下校正目镜测微尺每格的长，去掉台尺换上待测样本片，在高倍镜下测出十个酵母菌宽和长的格数， 将校正值乘入，算出十个酵母菌的平均宽和平均长，以平均宽Xμm ×平均长Yμm表示酵母菌的大小。

48． 振荡培养通常用来培养__好气_ 微生物，享格特的厌氧操作方法通常用来培养_专性厌

氧__菌。

45．从土壤中分离真菌时, 通常在培养基中加入__孟加拉红__和_链霉素_ 抑制细菌的生长。 46．由于各种微生物对某种化合物如抗生素、染料的敏感性不同， 可以利用这一特征来从

土壤中分离出不同类群的微生物。 如在培养基中加入_青霉素( 链霉素)_ ，会杀死或抑制__细菌和放线菌_ 的生长而分离出__真菌_； 在培养基中加入__结晶紫_ ，有利于分离到革兰氏阴性菌。

47．检查乳品和饮料是否含有__大肠杆菌(E.Coli)_ 等肠道细菌，可采用 __伊红-- 美兰_

培养基，在这种培养基平板上大肠杆菌(E.Coli)__ 会形成具有__金属_光泽的紫黑色小菌落。 二．选择题：

1．牛肉膏蛋白胨培养基适用于 C 。 A．真菌

B、放线菌 C、细菌 D、蓝细菌

2．高氏1号培养基用来培养： C 。

A. 细菌 B. 真菌 C. 放线菌

3．实验室中最常用的真菌固体培养基是 C 。 A．马铃薯培养基

B、高氏一号培养基

C、马铃薯蔗糖培养基

D、牛肉膏蛋白胨培养基

4．配制固体培养基时，琼脂的常用浓度为： C 。

A．0.2%左右 B、0.5%左右 C、1.5-2.0% D、15-20%

5．配制半固体培养基时，琼脂的常用浓度为： B 。

A．0.2%左右 B、0.5%左右 C、1.5-2.0% D、15-20%

7． 半固体培养基的琼脂加入量通常是: B 。

A. 1% B. 0.5% C. 0.1% D．1.5-2.0%

8． 半固体培养基的主要用途是: C 。

A. 检查细菌的运动性 B. 检查细菌的好氧性 C. A.B. 两项

8．培养基配制好后分装入试管，液体培养基的分装量以试管高度的： C 为宜。 A．1/2

B．1/3 C、1/4 D、1/5

9．固体培养基的分装量不超过试管高度的 D 。 A．1/2

B．1/3 C、1/4 D、1/5

10．固体培养基分装三角量以不超过三角烧瓶容积的 A 为宜。

A．1/2 B．1/3 C、1/4 D、1/5

11．半固体培养基的分装量以试管高度的 B 为宜。

A．1/2 B．1/3 C、1/4 D、1/5

12．盛放培养基的试管应该塞棉花是因为起 A 作用

A 过滤 B 密封 C 防潮 D 阻氧

13．培养基中使用酵母膏主要为微生物提供： A 。

A．生长因素 B．C源 C. N源

14．用牛肉膏作培养基能为微生物提供： D 。

E. C 源 F. N 源

G. 生长因素

H. A,B,C 都提供

15．制备培养基中常用的碳源物质是： A 。

A，糖类物质 B．碳酸盐 C．农副产品

16．高温干燥灭菌的温度应控制在 C 。 A．120ºC，1h

B、140ºC，2h C、150～170ºC，1～2h D、200ºC，3h

17．干热灭菌的关键操作是: A 。

A. 灭菌物不能有水 B. 保温过程中不能开箱门 C. 降温不能太快

18．一般试验室用培养皿灭菌，常采用 A 。 A．灭菌，150～170 ºC，1-2 h

B、湿热高压蒸汽灭菌121 ºC，3 h

C．间歇灭菌，2次，100 ºC，每次1 h

D、巴斯德灭菌60 ºC，1 h

19．在寻常烤箱中，在１６０℃达到灭菌效果所需时间为 D 。

Ａ ５分钟 Ｂ ３０分钟 Ｃ ５０分钟 Ｄ ９０分钟

20．实验室培养基高压蒸汽灭菌的工艺条件是: A 。

A. 121℃/30min B. 115℃/30min C. 130℃/30min

21．使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是: A 。

A. 排冷气彻底 B. 保温时间适当 C. 灭菌完后排气不能太快 D. A-C

22．常规加压灭菌的致死温度为 C 。 A．100ºC，半小时

B、110ºC，半小时 C、121ºC，半小时 D、105ºC，半小时

23．高压灭菌锅杀死微生物需要下列所有条件，除 C 之外。

Ａ 蒸汽温度１２１℃ Ｂ 每平方英寸１５英镑压力 Ｃ １０个大气压的体积 Ｄ １５分钟

24．一种含有葡萄糖的液体培养基，需采用： B 灭菌 A．15磅/英寸²加压蒸汽灭菌 B、10磅/英寸²加压蒸汽灭菌 C、煮沸消毒

25．巴氏消毒的工艺条件是: C 。

A. 62-63℃/30min B. 71-72℃/15min C. A.B. 均可

26．牛奶常用的消毒法为 A 。

Ａ 巴斯德消毒法 Ｂ 煮沸消毒法 Ｃ 间歇灭菌法 Ｄ 加压蒸汽灭菌法

27．任何降低环境中微生物数量的物质是 A 。

Ａ 消毒剂 Ｂ 防腐剂 Ｃ 媒介 Ｄ 氧化剂

28．乙醇是常用的消毒剂。其杀菌效果最好的浓度为： B 。

A．50%

B、70% C、95% D、100%

29．间歇灭菌过程需要下列所有条件，除了 B 之外。

Ａ 蒸汽温度１００℃ Ｂ 每平方英寸１０英镑压力 Ｃ ３０分钟时间 Ｄ 连续三天的处理

30，无菌室空气灭菌常用方法是: D 。

A. 甲醛熏蒸 B. 紫外灯照射 C. 喷石炭酸 D. A.B. 并用

31．紫外线能杀菌。其中以波长为 C 的杀菌力最强。 A．200nm

B、300nm C、265nm—266nm D、300nm以上

32．下列方法中测定样品中微生物活菌数量的方法是 A 。 A．平板菌落计数法

B、比浊法 C、测含氮量法 D、称干重法

33．平板划线分离法需要下面所有的物品，除了 D 之外。

Ａ 接种环 Ｂ 琼脂培养基平板 Ｃ 细菌的培养物 Ｄ 电泳仪

34．细菌平板接种制备好后，放入恒温箱培养，需 C 。 A．正放

B、斜放 C、倒置 D、随意

35．深层穿刺接种细菌到试管固体培养基中能 A 。

Ａ 提供厌氧菌生长条件 Ｂ 除去代谢废物的一个机会 Ｃ 增加钾和钠离子的数目 Ｄ 增加氧气

36．除 D 外，下列方法都是厌氧菌培养法。

Ａ 高层琼脂柱 Ｂ 亨盖特滚管技术 Ｃ 堆积培养 Ｄ 曲法培养 A. 复红 B. 蕃红 C. 结晶紫 D. 孔雀绿 E. A-D 均 可

38．革兰氏染色是对 A 的染色。 A．细胞壁

B、细胞质 C、细胞膜 D、细胞核

39．革兰氏染色法乙醇脱色后革兰氏阴性细菌呈 C 。 A．蓝紫色

B、红色 C、无色 D、深绿色

40．革兰氏染色的关键操作步骤是 C 。 A．结晶紫染色

B、碘液固定 C、酒精脱色 D、复染

41．用来染芽孢的染料通常是 A 。 A．孔雀绿

B、结晶紫 C、复红 D、番红 A. 菌丝要分散

B. 菌丝首先要用50%的乙醇浸润 C. 盖盖玻片不能有气泡 D. A-C

43．下列 B 是显微镜的高倍镜。

A 15×

42．霉菌水浸制片的关键操作是： D 。

37．进行简单染色使用的染色液通常是: A 。

B 45× C 90× D 100×

44．微生物镜检时要 A 。

A 先低倍镜后高倍镜 B 直接高倍镜 C 直接用油镜 D 先高倍镜后低倍镜

45．在使用显微镜油镜时为了提高分辨力，通常在镜头和盖玻片之间滴加: C 。

A. 二甲苯 B. 水 C. 香柏油

46．在高倍镜调至最清晰后，下列油镜操作顺序正确的是： A 。

1．将镜筒提升 2、转换油镜镜头 3、滴加香柏油 4．下降镜筒 A．（1）、（2）、（3）、（4） B．（2）、（1）、（3）、（4）

C．（3）、（2）、（1）、（4） D（3）、（1）、（2）、（4）

47．显微镜使用过后，用擦镜纸擦过香柏油，要用有机熔剂擦掉油镜上残存的香柏油，使用的是

D 。 A．乙醚

B、酒精 C、丙酮 D、二甲苯

三．判别题：

1．显微镜镜头的放大倍数越大，它的数值孔径值越大，其镜口角也越大。(√ )。 2．数值孔径愈大，显微镜的分辩率愈高（ √ ）

3．使用高倍镜和油镜时，进入物镜的光线要尽可能明亮些（ √ ） 4．用油镜镜检时应将聚光器升至最高。((√ )。 5．使用高倍镜时, 可将聚光器升至最高。(× )。 6．使用油镜的正确操作步骤是: (√ )。

1. 低倍镜观察。 2. 高倍镜观察。

3. 转出高倍镜头， 滴加香柏油后用油镜观察。

7．为了节省时间，可直接在染色涂片上滴加香柏油后, 直接用油镜观察。(× )。 8．在擦拭显微镜镜头时，应向一个方向擦拭。(√ )。

9．在使用完油镜后，镜头上的油要用擦镜纸擦干净（ × ） 10．浸油的油镜头可用软的卫生纸擦净。(× )。

11．制作细菌涂片时，菌种要多些，以免个体太小不好寻找（ × ） 12．制成涂片后，就可以在火焰上迅速通过1—2次来固定涂片（ × ） 13．细菌染色中的水洗要从玻片上端细细流下，避免直接冲在涂片上（ √ ） 14．涂片水洗至无色后，便可以置于油镜下观察（ × ）

15．革兰氏染色的关键一步是脱色。如脱色时间过长，会造成革兰染色反应的假阳性( × ) 16．在革兰氏染色中，被染成红色的细菌称革兰氏阳性菌，染成紫色的细菌称革兰氏阴性菌

( × )

17．革兰氏染色法是细胞质染色， 而不是细胞壁染色。( × )

18．E. coli 经革兰氏染色后，菌体呈红色，它是革兰氏正反应细菌。( × )。 19．芽孢染色中：

（1）染色过程须用微火加热，自染料开始冒蒸汽时算起约4—5分钟（ √ ） （2）在加热过程中切勿使染料蒸干,必要时可添加少许染料（ √ ） （3）加热完毕后,要马上用自来水冲洗至孔雀绿不再裉色为止（ × ） 20．观察根霉，青霉只需用低倍镜观察即可。(× ) 21．在光学显微镜下，根霉的孢子囊是透明的。( × )。 22．所有细菌菌落的表面都是光滑湿润状。( × ) 23．所有真菌菌落的表面干燥，呈绒毛状。( × )。 24．所有放线菌菌落表面干燥，呈粉粒状。( × )

25．实验室做固体培养基时，常加1.8%的琼脂作凝固剂，做半固体培养基时, 琼脂加入量

通常是 0.5%。 :( √ )。

26．实验室做固体培养基，常加 2% 的琼脂作凝固剂，做半固体培养基时，琼脂加入量通常是1%。( × )。

27．为了满足微生物对微量元素的需要，配制培养基所用的水最好使用自来水。(√ )。 28．用分装器将培养基分装试管时，应谨防培养基沾染试管口。( √ )。 29．琼脂的熔化温度是80℃以上，凝固温度是45℃以下。( × )。 30．琼脂的熔化温度是95℃以上，凝固温度是45℃以下。( √ )。 31．棉花塞塞入试管的长度应为棉塞全长的 2/3。( √ )。 32．棉花塞入试管的长度应为棉塞全长的 1/2。( × )。 33．摆斜面的长度应不超过试管长度的 2/3。( × )。 34．摆斜面的长度应不超过试管长度的1/2。( √ )。

35．配制固体培养基时，一旦分装好后要趁热将试管摆斜，使培养基凝成斜面。( × ) 36．培养基配制好后就可以马上用于接种。( × )

37．用于固化培养基时琼脂较之明胶具有更多的优点（ √ ）

38．火焰灼烧法灭菌彻底、迅速简便且应用广泛，适于各种物体的灭菌（ × ） 39．干热灭菌法相对湿热灭菌法的优点是可保持物品干燥（ √ ）

40．玻璃器材洗净后在急需时可采用高压蒸汽灭菌，而不能用干热灭菌。( √ )。

41．加压蒸汽灭菌时，时间从压力开始升高时算起约20 min（ × ）

42．使用手提灭菌锅灭菌后，为了尽快排除锅内蒸汽，可直接打开排气阀排气。( × )。 43．酒精浓度愈高，杀菌力愈强( × )

44．波长为265nm—266nm的紫外线杀菌力最强。因此可以用于培养基的灭菌( × ) 45．巴斯德消毒法不能杀死细菌的芽孢。（ √ ） 46．可采用高压蒸汽灭菌对抗体进行灭菌。（ × ） 47．对热敏感的溶液可采用巴斯德消毒法来灭菌。（ × ） 48．无菌吸管上端塞入棉花是为了过滤口中的有菌空气。:( √ )。 49．无菌吸管上端塞入棉花的目的是为了防止菌液吸入口中。( × )。 50．稀释平板测数通常是采用十倍稀释法。( √ )。 51．稀释平板测数通常采用的是二倍稀释法。( × )。

52．做稀释平板测数时，只需一支吸管从头稀释到尾即可。( × )。 53．做稀释平板测数时，每做一个稀释度都必须更换一支无菌吸管。( √ )。

54．稀释平板测数时，放线菌计数的标准是选择每皿中菌落数在30-300个之间的稀释度进

行计数。( √ )。

55．稀释平板测数时细菌计数的标准是选择每皿中菌落数在30-300 个之间的稀释度进行计

数。( √ )。

57． 稀释平板测数时， 细菌、放线菌，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在30-300 个

的稀释度进行计数。( × )。

57．稀释平板测数时，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10-100 个的稀释度进行计数。(√ )。

58．稀释平板测数时，细菌、放线菌、真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10-100个的稀释度进行计数。(× )。

59．用混菌法测微生物活菌数时，每个平皿中的菌液加入量是1ml。:( (√ )。 60．用涂抹法测微生物活菌数时，每个平皿中的菌液加入量是0.1ml。（ (√ ）。 61．稀释平板测数时，无论是用混菌法，还是用涂抹法,每个平皿中的菌液加入量都是 1ml。( × )。

62．稀释测数用的无菌水通常是由自来水灭菌而成。(√ )。

63．显微镜下对细菌细胞计数的数量结果要低于平板技术获得的结果（ × ） ．实验室通常使用血球计数板测微生物的总菌数。(× )。 65．血球计数板两边的平台比计数区高 0.1cm。( × )。 66．血球计数板两边的平台比计数区高 0.1mm。( √ )。 67．血球计数板计数区的面积是 1 mm。 ( √ )。

68．用血球计数板计数时，任数5个大方格(80个小格)的菌数即可。:( × )。 69．在使用细菌计数板计数时，为了防止计数偏大，计数区四周压线的菌只能数两边。( √ )。

70．血球]计数板计数区每小格的体积是1/4000mm 。（ √ 〕。

71．血球计数板计数区共有400个小格，每小格的面积是 1/400 cm。( × )

2

3

2

72．镜台测微尺每小格的实际长度是10微米。( √ )。 73．目镜测微尺每小格的实际长度是10μm。( × )。 74．镜台测微尺每小格的实际长度是10nm( 纳 米)。( × )。

75．目镜测微尺每格的实际长度是未知的，需用长度已知的镜台测微尺校正。( √ )。 76．测微生物的细胞大小时, 需要校正的是镜台测微尺每格的实际长度。:( × )。 77．测微生物细胞大小时，需要校正的是目镜测微尺每格的实际长度。( √ )。

四、名词解释 数值孔径 然培养基

半合成培养基 选择培养基 加富培养基 鉴别培养基 革兰氏染色法 简单染色法 消毒 灭菌 巴氏消毒 干热灭菌 间歇灭菌 过滤除菌 湿热灭菌 稀释平板计数法 显微直接计数法 平板划线分离法

五、问答题

1．试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法。 2．试述划线分离的操作方法。 3．如何检查细菌的运动性? 4．简述配制培养基的基本原则:

5．试述配制培养基的基本过程及应该注意的问题。 6．试述显微计数的基本方法。

7．革兰氏染色反应的成败关键是什么?为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义? 8．如何从土壤中分离得到一个微生物的纯培养体?

9．察氏培养基的组成为:蔗糖:30克,磷酸氢二钾:1.0克,钠:2克, 硫酸镁0.5克, 氯化钾:0.5克,硫酸亚铁: 0.01克,蒸馏水: 1000 ml.试述: 1.该培养基的C源, N源各是什么物质。 2 .除C源和N源外的其它物质起什么作用: 3.该培养基为什么不加生长因子?

分辨力 无菌操作 超净工作台 纯培养技术 培养基 合成培养基 天