HE染色和吉姆萨染液

一、HE染色 试剂： 苏木素染液：苏木精1g；无水乙醇25mL；硫酸铝钾10g；蒸馏水350mL；碘酸钾0.1g；冰醋酸10mL。A 液：用25mL 无水乙醇溶解1g苏木精，摇动即可溶解。B 液：用350mL 蒸馏水溶解10g硫酸铝钾，摇动或振荡即可溶解。把A 液和 B 液混合，加入碘酸钾摇动至颜色加深。最后加入10mL冰醋酸，摇动颜色变为深葡萄酒红色。染液配制当日即可应用于染色。酸化液：醋酸20-35mL加蒸馏水至700mL。 伊红染液：储液：取1g伊红，溶于100mL 95%的乙醇，待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状，避光保存备用。工作液：取一定量的伊红储液，加入等量70%乙醇，此液即为伊红染液的工作液。 染色步骤： （1）细胞爬片放用PBS漂洗3次，每次5min，无水乙醇固定5min，风干。 （2）95%乙醇1min，75%乙醇1min，三蒸水1min。 ( 3 ) 浸洗5 % 的醋酸液 ( 酸化液 ) 数秒。 ( 4 ) 苏木精染液 3 - 5 m i n，胞核呈橙红色。 ( 5 ) 自来水冲洗至颜色变蓝。 ( 6) 盐酸乙醇液分化数秒，颜色再次返红 。 (7) 自来水再次冲洗，返蓝。 ( 8) 伊红染液5min，流水漂洗15min左右。 二、吉姆萨染色 试剂： 吉姆萨染液配制：取吉姆萨粉末1g溶于66ml甘油中研磨混匀，然后放置55-60℃水浴2h，冷却后加入66ml甲醇中混匀，过滤后棕瓶分装保存。 PBS甲醇液：PBS与甲醇一比一混合。 染色步骤： （1）细胞爬片使用PBS漂洗3次，每次5min。 （2）加PBS甲醇液静置2min，去掉PBS甲醇液。 （3）加甲醇固定10min，去掉甲醇，加入新无水甲醇漂洗去掉。（4） 加吉姆萨染液2ml/25cm2，2min后加入8ml水稀释并晃动染液2min，去掉染液。 （5）流水冲洗10~20s，湿润时观察。